全基因組測序要注意的事項(xiàng):全基因組測序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測序。技術(shù)路線:提取基因組DNA,然后隨機(jī)打斷,電泳回收所需長度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接頭,進(jìn)行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者M(jìn)ate-Pair(SOLiD)的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測序。然后對(duì)測得的序列組裝成Contig,通過Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold,進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測序深度與覆蓋度、測序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測序深度(Sequencingdepth)是指測序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評(píng)價(jià)測序量的指標(biāo)之一。測序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系,測序帶來的錯(cuò)誤率或假陽性結(jié)果會(huì)隨著測序深度的提升而下降。測序的個(gè)體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當(dāng)測序深度在50X~100X以上時(shí),基因組覆蓋度和測序錯(cuò)誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。
病毒的全基因組測序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系。國內(nèi)深度測序突變分析服務(wù)公司
高通量測序在病毒準(zhǔn)種研究中如何應(yīng)用 在采用高通量測序技術(shù)研究準(zhǔn)種耐藥性方面,人類免疫缺陷病毒(HIV)較為突出。人類免疫缺陷病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶有非常大的錯(cuò)配傾向,造成幾乎每復(fù)制1輪出現(xiàn)1個(gè)堿基對(duì)替換突變。被侵染的個(gè)體中存在非常巨大的病毒群,每天有1010個(gè)病毒粒子產(chǎn)生和死亡,在侵染后這種行為導(dǎo)致病毒快速形成一個(gè)多樣性的群,即準(zhǔn)種。高通量測序是研究大群體中序列突變體特征的先進(jìn)方法,它的一種應(yīng)用是對(duì)個(gè)體抗病毒治療失敗時(shí)產(chǎn)生的數(shù)量很少的耐藥突變的定量研究。RNA全基因組病毒分析哪家好病原學(xué)的診斷始終是傳染性疾病診斷的重要一環(huán)。
一直以來,病毒基因組測序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列,測序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大,其序列拼接難度也隨之增加。而且對(duì)于低濃度高復(fù)雜度的樣本,研究者除了PCR外別無他法。而PCR方法往往具有偏好性,丟失的片段將為序列組裝帶來非常高的失敗率。對(duì)于完全未知的樣本,無法通過PCR進(jìn)行富集,要鑒定其種類需要調(diào)用各種方法,逐個(gè)嘗試,工作量之大,其效率之低,使得一個(gè)新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。
病毒全基因組測序定中利用病毒傳播過程中核酸序列上特定位置的變化來進(jìn)行分型,著重于區(qū)分不同型別病毒的來源,是我國調(diào)整防控策略的重要依據(jù)之一。傳統(tǒng)的病原微生物檢測手段包括形態(tài)學(xué)檢測、培養(yǎng)分離、生化檢測和免疫學(xué)檢測。這些方法檢測周期長、靈敏度低,對(duì)操作人員的技術(shù)水平要求比較高等因素;熒光定量PCR技術(shù)和等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等分子生物學(xué)的檢測方法部分解決了上述問題,簡單快速,通過對(duì)核酸特異性序列的檢測,可在短時(shí)間內(nèi)快速判斷病原體的種類,但是這些方法無法進(jìn)行混合傳染鑒定和病毒溯源,隨著基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,高通量測序技術(shù)已經(jīng)能夠做到不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng),可直接對(duì)臨床樣本中的核酸進(jìn)行高通量測序,然后與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì),實(shí)現(xiàn)傳染性疾病的溯源、檢測、分型和耐藥評(píng)估等多個(gè)方面,受到越來越多臨床和科研工作者的關(guān)注。對(duì)病毒全基因組進(jìn)行測序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列。
RNA/DNA病毒測序?qū)Σ《净蚪M進(jìn)行測序是快速了解病毒突變、毒力變化、病毒型別的有效方法??梢愿鶕?jù)病毒基因組大小和類型,采用PCR、RT-PCR或shotgun測序法,對(duì)病毒的部分或全長基因組測序,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。服務(wù)標(biāo)準(zhǔn):測出的序列準(zhǔn)確性在99%以上;病毒全基因組測序測出序列在總基因組大小95%以上;數(shù)小于5個(gè);Shotgun測序的覆蓋度在6以上;PCR和RT-PCR測序達(dá)到2。服務(wù)說明:1、提供病毒DNA或RNA作為樣品。2、PCR測序的DNA樣品總量大于5μg,濃度大于20ng/μl。DNA無降解。3、Shotgun測序法的DNA樣品總量大于20μg,濃度大于100ng/μl。DNA無降解。4、用RT-PCR和PCR測序法在提供參考序列時(shí)需同時(shí)提交樣品部分序列與參考序列的比對(duì)文件,確保同源性在95%以上。
高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測序和分析.全基因組病毒測序服務(wù)公司
病毒全基因組測序具有的特點(diǎn):獨(dú)有的一定定量技術(shù),實(shí)現(xiàn)病原定量分析!國內(nèi)深度測序突變分析服務(wù)公司
對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測序費(fèi)用合理,上海探普生物科技有限公司致力于醫(yī)藥、保養(yǎng),以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)管理的追求。探普生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供病毒測序,病毒全基因組測序,病毒宏基因組測序,未知病原鑒定。探普生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長,又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。探普生物始終關(guān)注醫(yī)藥、保養(yǎng)市場,以敏銳的市場洞察力,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長共贏。
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