RNA病毒測序進化分析方法

來源: 發(fā)布時間:2023-08-24

高通量測序技術(shù)又稱“下一代“測序技術(shù)或深度測序技術(shù),可以一次性對幾十萬至幾百萬條DNA分子進行序列測定?,F(xiàn)已普遍應(yīng)用在基因組測序、基因表達分析、非編碼小分子RNA鑒定、轉(zhuǎn)錄因子靶基因篩選及DNA甲基化等相關(guān)的研究領(lǐng)域。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定,因此在有些文獻中稱其為下一代測序技術(shù)(nextgenerationsequencing)足見其劃時代的改變,同時高通量測序使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能,所以又被稱為深度測序(deepsequencing)。


病原學(xué)的診斷始終是傳染性疾病診斷的重要一環(huán)。RNA病毒測序進化分析方法

全基因組測序要注意的事項:全基因組測序是對未知基因組序列的物種進行個體的基因組測序。技術(shù)路線:提取基因組DNA,然后隨機打斷,電泳回收所需長度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接頭,進行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法對插入片段進行測序。然后對測得的序列組裝成Contig,通過Paired-End的距離可進一步組裝成Scaffold,進而可組裝成染色體等。組裝效果與測序深度與覆蓋度、測序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測序深度(Sequencingdepth)是指測序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評價測序量的指標之一。測序深度與基因組覆蓋度之間是一個正相關(guān)的關(guān)系,測序帶來的錯誤率或假陽性結(jié)果會隨著測序深度的提升而下降。測序的個體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當(dāng)測序深度在50X~100X以上時,基因組覆蓋度和測序錯誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準確。



四川全基因組病毒測序服務(wù)公司病毒全基因組測序產(chǎn)品特點:結(jié)果穩(wěn)定可靠。

病毒全基因組測序具有的特點:1.不預(yù)設(shè)目標檢出物,樣本的所有病原信息一網(wǎng)打盡;2.無需培養(yǎng)和特異性擴增,對采集臨床樣本直接檢測;3.獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析,使病原診斷更準確;4.與臨床各領(lǐng)域有名**共同打造呼吸道系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)科系統(tǒng)和血流系統(tǒng)傳染病原數(shù)據(jù)庫,更加貼合需求;5.采用高通量測序儀,全流程質(zhì)控,結(jié)果穩(wěn)定可靠;6.整體檢出率陽性率較傳統(tǒng)方法提升25~30%:肺泡灌洗液檢出率60~80%,腦脊液檢出率40~60%,血液檢出率40~60%;7.專業(yè)化服務(wù):臨床微生物**出具報告,專業(yè)醫(yī)學(xué)團隊報告解讀。針對疑難報告,由**進行深度解析;8.完善的售后服務(wù):基于PCR技術(shù)和抗原抗體技術(shù)的售后驗證平臺,致力于解決臨床的每一個疑問。


病毒全基因組測序定:探普生物對病毒的全基因組進行測序的實驗基于二代測序技術(shù)。樣本經(jīng)過核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。先,在核酸純化環(huán)節(jié),探普提供專門針對性的核酸純化樣本指南,以提高目的物種的核酸純度和得率,與此同時探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二,文庫構(gòu)建環(huán)節(jié),樣本的核酸具備濃度低,總量少的特點。探普生物專門針對這一點開發(fā)了超微量核酸文庫構(gòu)建,可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測序文庫。第三,生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對病毒的全基因組進行測序的下機數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點,優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫,搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標物種序列。


在探普生物長時間運行過程中,接觸到的對病毒的全基因組進行測序項目有比較豐富的應(yīng)用場景。

能實現(xiàn)對病毒的全基因組進行測序的技術(shù)手段:早期在高通量測序技術(shù)普及之前,對病毒的全基因組進行測序是通過非特異性擴增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準確度高,讀長很長,但與此同時,擴增和克隆工作費時費力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強,這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標準濃度和體積后進行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。




病毒全基因組測序具有的特點:完善的售后服務(wù)。廣東病毒測序突變分析找哪家

病毒基因組測序是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。RNA病毒測序進化分析方法

病毒的基因重組特點是什么? 滅活病毒間也會發(fā)生重組 :例如用紫外線滅活的兩株同種病毒,一同培養(yǎng)??墒箿缁畹牟《緩?fù)活產(chǎn)生出侵染性病毒體,此稱為多重復(fù)活(Multiplicity reactivation),這是因為兩種病毒核酸上受損害的基因部位不同,由于重組相互彌補而得到復(fù)活。因此現(xiàn)今不用紫外線滅活病毒制造疫苗,以防復(fù)活。 死活病毒間發(fā)生重組 :例如將能在雞胚中生長良好的甲型流感病毒(A0或A1亞型)疫苗株經(jīng)紫外線滅活后,再加亞洲甲型(A2亞型)活流感病毒一同培養(yǎng),產(chǎn)生出具有前者特點的A2亞型流感病毒,可供制作疫苗,此稱為交叉復(fù)活。RNA病毒測序進化分析方法

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