微生物鑒定的用途:醫(yī)療保?。簻?zhǔn)確、快速地鑒定細(xì)菌和寄生蟲,以進(jìn)行正確和及時(shí)的疾病診斷,并進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑\療。流行病學(xué):為了追蹤病原體和追蹤疾病的傳播和暴發(fā),以及鑒定新的隔離物,例如耐藥隔離。制藥工業(yè):由于微生物是對(duì)無菌性的重大威脅,對(duì)環(huán)境微生物的準(zhǔn)確鑒定通常是制藥行業(yè)良好的生產(chǎn)實(shí)踐(GMP)要求。其他用途:包括刑事調(diào)查、微生物取證和環(huán)境研究等。傳統(tǒng)的微生物鑒定方法依賴于表型鑒定,主要是用染色法、培養(yǎng)法和簡(jiǎn)單的生化檢驗(yàn)。宏觀特征包括微生物的整體外觀,其形狀、大小、顏色和氣味等,可以用肉眼看到。通過在瓊脂培養(yǎng)基檢查其形態(tài)學(xué)/宏觀特征來確定微生物的類型。同一物種在不同的培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)不同的表現(xiàn)。未知病原微生物中有很多微生物通過傳統(tǒng)技術(shù)是無法鑒別的。武漢隨機(jī)PCR未知病原微生物篩查技術(shù)
有些微生物是有益的,也有些微生物的存在可引起多種應(yīng)變性疾病和傳染性疾病,會(huì)對(duì)人身體健康產(chǎn)生不良的影響;還會(huì)使食品及原料腐爛和變質(zhì)。所以,微生物檢測(cè)必須嚴(yán)格把關(guān)。微生物檢測(cè)的必要性:1、食品:食品因含有微生物可依賴生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)成分,因此食品會(huì)受到微生物不同程度的污染。食品質(zhì)量安全關(guān)系到人民**的身體健康,生命安全及社會(huì)經(jīng)濟(jì)。為了食品的安全,人們的健康,微生物檢測(cè)極其必要。2、醫(yī)院:醫(yī)院都和微生物有著極為密切的關(guān)系。加強(qiáng)醫(yī)院的微生物檢驗(yàn)與監(jiān)測(cè),對(duì)于預(yù)防和控制醫(yī)院起著十分重要的作用。3、空氣:室內(nèi)空氣是微生物污染的重要傳播途徑。室內(nèi)舒適的溫度,濕度等環(huán)境條件以及相對(duì)密閉的室內(nèi)更為各種有害微生物滋生創(chuàng)造了條件。只有有效地檢測(cè)微生物的含量,才能采取有效地措施,才能保證人體健康不受微生物的危害。微生物鑒定診斷可以通過顯微鏡觀察菌落特征對(duì)微生物種類進(jìn)行判斷。
微生物檢測(cè)方法:計(jì)數(shù)器測(cè)定法即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi),用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的(0.1mm3),因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù),可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行,可立即得出結(jié)果,不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù),也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化,小孔能通過一個(gè)細(xì)胞,當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí),電阻明顯增加,形成一個(gè)脈沖,自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確,但它只識(shí)別顆粒大小,而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此,要求菌懸液中不含任何碎片。
微生物鑒定系統(tǒng)的工作原理因不同的儀器和系統(tǒng)而異。不同的細(xì)菌對(duì)底物的反應(yīng)不同是生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌的基礎(chǔ),而試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度取決于鑒定系統(tǒng)配套培養(yǎng)基的制備方法、培養(yǎng)物濃度、孵育條件和結(jié)果判定等。大多微生物鑒定系統(tǒng)采用細(xì)菌分解底物后反應(yīng)液中pH的變化,色原性或熒光原性底物的酶解,測(cè)定揮發(fā)或不揮發(fā)酸,或識(shí)別是否生長(zhǎng)等方法來分析鑒定細(xì)菌。藥敏試驗(yàn)分析系統(tǒng)的基本原理是將微量稀釋在條孔或條板中,加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育,通過測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)的濁度,或測(cè)定培養(yǎng)基中熒光指示劑的強(qiáng)度或熒光原性物質(zhì)的水解,觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。在含有培養(yǎng)基中,濁度的增加。對(duì)于無菌藥品生產(chǎn)來說生產(chǎn)區(qū)域的微生物種類非常有限。
傳統(tǒng)的血清學(xué)與分子生物學(xué)方法如ELISA與PCR,由于病原微生物的特異性差異,有時(shí)只能用于病原微生物特定種甚至特定種特定株系分離物的檢測(cè);而電鏡與生物學(xué)接種鑒定方法又難以將病原微生物鑒定至物種水平。相比之下,高通量測(cè)序技術(shù)可以提供一條新的病原微生物鑒定途徑。病原微生物檢測(cè)的不可知性使得高通量測(cè)序成為研究這類病原微生物的有用工具。目前,該技術(shù)在人類與動(dòng)植物病原微生物的鑒定中已經(jīng)有較多的應(yīng)用。高通量測(cè)序在臨床virology領(lǐng)域的應(yīng)用病毒作為一種古老的物種存在于自然界,幾乎能夠在任何物種寄生,與人類健康息息相關(guān)。雖然大部分病毒沒有出現(xiàn)明顯的臨床癥狀,少數(shù)病毒能夠引起人類多種疾病,表現(xiàn)出包括發(fā)熱、腹瀉,出血、出疹、呼吸道癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等。臨床細(xì)菌學(xué)不可缺少的基本技術(shù),是獲得純培養(yǎng)物的必要手段。微生物鑒定診斷
微生物檢測(cè)方法中的比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。武漢隨機(jī)PCR未知病原微生物篩查技術(shù)
實(shí)現(xiàn)病原微生物種類鑒定有哪些技術(shù)手段?病原微生物的研究歷史不算長(zhǎng)。發(fā)展至今已經(jīng)有了成套的檢測(cè)體系。利用不同類別的微生物有其本身不同于其他微生物的特點(diǎn),如從培養(yǎng)形態(tài)、顯微鏡觀測(cè)形態(tài)、生物學(xué)功能、致病性、生物化學(xué)反應(yīng)、抗原抗體反應(yīng)、核酸序列等方面,都可以進(jìn)行相當(dāng)程度的鑒別。即便如此,依然有很多微生物通過傳統(tǒng)技術(shù)無法鑒別。高通量測(cè)序技術(shù)問世,給微生物鑒別打開一扇新的大門。它對(duì)核酸進(jìn)行測(cè)序是非特異的,因此,對(duì)一無所知的核酸也可以實(shí)現(xiàn)鑒別。武漢隨機(jī)PCR未知病原微生物篩查技術(shù)
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