河南如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家

EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(MeilunEdUCellProliferationKitwithAlexaFluor488)，是一種利用核苷滲入法對細胞增殖情況進行快速、簡單、高靈敏檢測的試劑盒。其原理為：試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2′-deoxyuridine)是一種胸苷(T)類似物，EdU可以在在細胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能與疊氮化物(如熒光探針AlexaFluor488Azide)通過Cu+的催化發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應非常迅速，被稱作點擊反應(Clickreaction)(圖1)。通過點擊反應，新合成的DNA會被綠色熒光標記，然后通過檢測熒光信號實現(xiàn)細胞增殖的檢測。EdU細胞增殖檢測試劑盒運用再哪些領域？河南如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家

保存條件：4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。注意事項：由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方，以緩解蒸發(fā)。MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。河南咨詢EdU細胞增殖檢測試劑盒價格上海東寰與您分享EdU細胞增殖檢測試劑盒對如今市場的影響。

直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的準確方法之一，EdU細胞增殖檢測試劑盒采用另外一種胸腺嘧啶核苷酸類似物-EdU（5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷），在細胞增殖時EdU能夠插入正在復制的DNA分子中，利用EdU與染料之間的點擊化學(ClickChemistry)反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析，可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法相比(圖1)，更簡單，更快速，更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性（酸解、熱解、酶解）處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。EdU分析方法反應條件比較溫和，我們提供的一系列AndyFluor?染料標記可以用于多色通道選擇，也可以用于培養(yǎng)細胞分析及組織切片分析（圖2）。

熒光試劑請避光保存。反應緩沖液10X1ml催化劑溶液25x400ulTAMRA紅色熒光溶液400x25ul緩沖添加劑粉末200mgHoechstX20ul使用前須知該產品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應用于流式細胞儀檢測。實驗步驟(以24孔板，HK2貼壁細胞為例)EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸。上海EdU細胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢。

EdU細胞增殖方法簡單，方便，無需DNA變性，能夠與各種抗體或熒光蛋白同時標記，以檢測細胞其他性狀特征。為了與其他熒光共同使用，東寰生物提供多種染料供選擇，覆蓋常用檢測通道，方便您輕松選擇適合的染料，比較大限度地擴展第三方染色的適用范圍，比較大限度地滿足您的檢測儀器要求，完全解決您的實驗難題。EdU細胞增殖檢測方法不需要劇烈的DNA變性操作，只需溫和的細胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點，更適合結合其他染料或蛋白標記（如P65抗體）等進行多重標記，從而在細胞水平獲取更多的直觀多維特征信息，更適合深入開展細胞功能方面的研究。有哪些領域需要使用EdU細胞增殖檢測試劑盒？浙江如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒說明書

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可通過CellProliferationELISA,BrdU(比色法.)或CellProliferationELISA,BrdU(發(fā)光法)進行細胞群落中DNA合成測定（BrdUbased）。優(yōu)點是：實驗結果同增殖細胞數目緊密相關，可一步完成細胞的溫和固定和變性，操作方便穩(wěn)定，不破壞細胞形態(tài)。5-Bromo-2′-dULabeling/DetectionKitI（熒光法）或KitII（AP）可使用試劑盒提供的BrdU單抗，以及酶或熒光偶聯(lián)二抗，檢測單細胞水平的DNA合成（BrdUbased）。前者通過免疫熒光檢測，后者通過熒光顯微鏡檢測。優(yōu)點是：使用核酸酶變性DNA，在不傷害細胞完整性的情況下使抗體結合BrdU。河南如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家