廣州重組腺相關(guān)病毒檢測

RCL復(fù)制型慢病毒檢測：鑒于RCL的潛在威脅，從慢病毒載體生產(chǎn)工藝的各個環(huán)節(jié)：主細(xì)胞庫(MCB)、工作細(xì)胞庫(WCB)、終末端細(xì)胞(EOPC)、慢病毒收獲液(UPB)、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞甚至CAR-T治  療病人的臨床樣本都需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測來核實是否存在RCL，從而可以大限度地避免病人因CAR-T治   療發(fā)生二次腫   瘤。復(fù)制型慢病毒RCL的指示細(xì)胞培養(yǎng)法檢測需28天，耗時較長；而基于VSV-G序列的Q-PCR方法和基于gag序列的PCR方法具有檢測時間短、靈敏度高、可重復(fù)性強等優(yōu)點。目前，許多CAR-T申報企業(yè)采用Q-PCR/PCR方法直接測定終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，作為快速放行方法。復(fù)制型病毒檢測試劑盒要求有哪些？廣州重組腺相關(guān)病毒檢測

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象：可能與ROX加入量不足相關(guān)，個別設(shè)備有ROX校正功能，不同型號設(shè)備對ROX的需求量會有差異，需設(shè)置實驗摸索合適的ROX加入量。歡迎了解正揚正揚生物復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測復(fù)制型慢病毒檢測方法有哪些？

美國FDA2020年發(fā)布的關(guān)于RCR/RCL病毒檢測指南提出：對于RCR/RCL的檢測包含指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/Q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）、PERT法（產(chǎn)物增強性逆轉(zhuǎn)錄檢測法）共4種檢測方法。其中，指示細(xì)胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用，但各國監(jiān)管機構(gòu)推薦并且可以接受的方法還是以指示細(xì)胞培養(yǎng)法為準(zhǔn)。由于細(xì)胞產(chǎn)品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，可使用Q-PCR法先進(jìn)行質(zhì)控放行，但指示細(xì)胞培養(yǎng)法應(yīng)同時進(jìn)行確認(rèn)。

生物檢測通常用于篩選載體產(chǎn)品中的RCR，而對輸注后患者的監(jiān)測則依賴于分子或血清學(xué)檢測。分子和血清學(xué)檢測比生物檢測更快，消耗的資源更少；然而，它們也很容易給出誤報。蕞常用的RCR病毒檢測是擴展的S+/L-測定和標(biāo)記拯救測定。蕞常見的RCL生物測定方法是通過在增殖階段將包裝細(xì)胞中的潛在RCL擴增至更高滴度，然后進(jìn)行ELISA或分子測定。迄今為止，在病毒載體、轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞產(chǎn)物或受體患者中尚未報告陽性RCR/RCL結(jié)果。因此，一些研究人員建議，可能是時候修改FDA指南中對RCR/RCL監(jiān)測的要求。CAR-T細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品中重組腺相關(guān)病毒檢測的監(jiān)管要求。

復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的必要性：RCL/RCR會同逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一樣，整合在細(xì)胞基因組中，從而產(chǎn)生因整合導(dǎo)致的原ai基因激  活，抑ai基因破壞或者使促細(xì)胞生長的因子高度表達(dá)而造成二次仲瘤的風(fēng)險。因其具有復(fù)制性，即產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，增加了因整合而造成的二次仲瘤的風(fēng)險。雖然目前在病毒制備體系方面改進(jìn)很多，很大程度上降低了RCL/RCR產(chǎn)生的風(fēng)險，但是仍不能完全排除，美國FDA要求對于γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體，需要在整個生產(chǎn)過程及不同階段進(jìn)行RCL/RCR檢測，需要對載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測，南京正揚有復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒性能如何？鄭州復(fù)制型慢病毒檢測注意事項

qPCR法復(fù)制型慢病毒檢測的優(yōu)點有哪些？廣州重組腺相關(guān)病毒檢測

美國FDA要求對于采用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體的產(chǎn)品，需要在整個生產(chǎn)過程及不同階段進(jìn)行RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測，針對載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測。針對慢病毒載體使用時RCL的檢測，除了金標(biāo)準(zhǔn)——指示細(xì)胞培養(yǎng)法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對其進(jìn)行補充檢測。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，是RCR/RCL補充檢測的優(yōu)   選方法。廣州重組腺相關(guān)病毒檢測