10× Genomics官方建議，當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細(xì)胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會損失一定的細(xì)胞數(shù)量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作?；诹冶嗄陠渭?xì)胞測序?qū)嶒灲?jīng)驗，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細(xì)胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實驗，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。烈冰實驗室包含從樣本處理到測序下機(jī)的全套實驗平臺。福州烈冰科技單細(xì)胞測序
10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細(xì)胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫。重慶10X Chromium X單細(xì)胞測序服務(wù)烈冰全線實驗平臺滿足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序。
關(guān)于10X Genomics單細(xì)胞平臺的樣本類型和樣本制備 ：10X平臺在上機(jī)前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊，獲得分離良好的細(xì)胞懸液、無細(xì)胞隨便、極少的細(xì)胞團(tuán)塊，且細(xì)胞活力高（＞70%）；此外，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān)。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的10X Genomics平臺兼容。一般來說，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來源和細(xì)胞類型而變化。每種組織類型都是獨特的，因此，必須在開始任何單細(xì)胞實驗之前優(yōu)化樣本制備，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗，累積10+物種、50+組織的消化protocol，若您的樣本為組織，且尚未成功將組織樣本消化成單細(xì)胞懸液，烈冰將盡可能提供技術(shù)及實驗上的幫助。
細(xì)胞計數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時，需要在細(xì)胞清洗和過濾之后測定細(xì)胞活力，這一點至關(guān)重要。測定細(xì)胞活力有許多種方法，烈冰多年單細(xì)胞測序經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)臺盼藍(lán)法在鑒定活細(xì)胞與死細(xì)胞的比例時效果很好。細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性以及目標(biāo)回收量和實際回收量之間的一致性，取決于我們了解樣本中有多少個細(xì)胞。一旦過濾和清洗完成，可采用細(xì)胞計數(shù)設(shè)備（如血球計數(shù)器或自動細(xì)胞計數(shù)儀）進(jìn)行定量。這些設(shè)備不但能提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)，還能計算出向微流體芯片上樣適量細(xì)胞所需的細(xì)胞懸液體積。烈冰對于一個細(xì)胞群體中的每個細(xì)胞單獨進(jìn)行建庫測序分析。
樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計數(shù)后，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟。在理想狀況下，一旦制備好樣本，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì)，因為這可能會影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時間，以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用。例如，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時間，它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離，增加了堵塞的風(fēng)險，而且每個團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計數(shù)，又降低了細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。此外，有些細(xì)胞更加粘稠，形成團(tuán)塊的速度更快。對于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時間差。十二年測序經(jīng)驗，烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。吉林單細(xì)胞測序服務(wù)
單細(xì)胞科聯(lián)合空間轉(zhuǎn)錄組，展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達(dá)情況，揭示精細(xì)病理區(qū)域中“喚醒”的信號通路。福州烈冰科技單細(xì)胞測序
細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時間和空間順序發(fā)生，因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時間特異性和空間特異性。時間特異性可以通過收集不同時間點的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）在單細(xì)胞懸液制備的過程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu)，無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題，其以點陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。福州烈冰科技單細(xì)胞測序
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計算機(jī)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢，市場營銷策劃，市場信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會調(diào)查、社會調(diào)研、民意調(diào)查、民意測驗），從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)，計算機(jī)、軟件及耗材（除?？兀?，軟件開發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】的公司，致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實、誠實可信的企業(yè)。烈冰生物深耕行業(yè)多年，始終以客戶的需求為向?qū)?，為客戶提?**的單細(xì)胞測序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細(xì)胞多組學(xué)測序。烈冰生物不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺，以應(yīng)用為重點，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價值，提供更優(yōu)服務(wù)。烈冰生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時代，對自身的建設(shè)毫不懈怠，高度的專注與執(zhí)著使烈冰生物在行業(yè)的從容而自信。