徐匯區(qū)挑選探針推薦貨源

DNA探針（DNA probe）是**常用的核酸探針，為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對(duì)的單鏈或雙鏈DNA，用特殊示蹤劑（如同位素、酶或有色基團(tuán)）進(jìn)行標(biāo)記；在適當(dāng)?shù)膒H值、溫度和離子強(qiáng)度下，DNA探針利用分子的變性、復(fù)性以及堿基互補(bǔ)配對(duì)的高度精確性，能與待測(cè)樣本中互補(bǔ)的非標(biāo)記單鏈DNA或RNA以氫鍵結(jié)合（雜交），形成雙鏈復(fù)合物（雜交體）。雜交體的穩(wěn)定性取決于兩條單鏈核苷酸之間的互補(bǔ)程度。在嚴(yán)格的條件下（高pH值、高溫、低離子強(qiáng)度），不完全匹配的雜交體的兩鏈將會(huì)解離，而完全匹配的雜交體將保持雙鏈。將未配對(duì)結(jié)合的探針洗去后，可用放射自顯影或酶聯(lián)反應(yīng)等檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)雜交反應(yīng)結(jié)果。電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學(xué)顯微鏡。徐匯區(qū)挑選探針推薦貨源

探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法，所不同的是所建DNA文庫為可表達(dá)性，克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原，然后用來源細(xì)菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆，所得到多個(gè)陽性克隆再經(jīng)其它細(xì)菌的抗血清篩選，***只與本細(xì)菌抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此細(xì)菌的特異性基因片段，它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對(duì)于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì)，然后測(cè)定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列，然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。楊浦區(qū)挑選探針按需定制為此，一般也采用鎢絲熱發(fā)射電子槍和2-3個(gè)聚光鏡的結(jié)構(gòu)。

特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針。RNA探針用途很廣，也容易獲得，但其不穩(wěn)定性限制了其商業(yè)用途。cDNA探針的獲得是，將特定的基因片段裝載到質(zhì)?；蚴删w中，經(jīng)過擴(kuò)增、酶切、純化等復(fù)雜的步驟，才能得到一定長度的cDNA探針。這一過程比較復(fù)雜，有相應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下，由核酸合成儀來完成，可廉價(jià)獲得大量的此類探針。質(zhì)量也相對(duì)來說更為穩(wěn)定。由于cDNA探針長度通常為數(shù)百至數(shù)千個(gè)堿基，所以有良好的信號(hào)放大作用，但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)堿基，滲透性強(qiáng)，但信號(hào)放大作用則較差，合成的多相寡核苷酸探針，敏感性可以達(dá)到cDNA探針?biāo)健?/p>

在原核表達(dá)系統(tǒng)中外源基因不僅進(jìn)行正向轉(zhuǎn)錄，有時(shí)還存在反向轉(zhuǎn)錄（即生成反義RNA），這種現(xiàn)象往往是外源基因表達(dá)不高的重要原因。另外，在真核系統(tǒng)，某些基因也存在反向轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生反義RNA，參與自身表達(dá)的調(diào)控。在這些情況下，要準(zhǔn)確測(cè)定正向和反向轉(zhuǎn)錄水平就不能用雙鏈DNA探針，而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應(yīng)并帶有供反應(yīng)后檢測(cè)的合適標(biāo)記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補(bǔ)的原理，用特異的基因探針即識(shí)別特異堿基序列的有標(biāo)記的一段單鏈DNA（或RNA）分子，與被測(cè)定的靶序列互補(bǔ)，以檢測(cè)被測(cè)靶序列的技術(shù)叫核酸探針技術(shù)。探針制備就是將目的基因進(jìn)行標(biāo)記。只要令探測(cè)器連續(xù)進(jìn)行2θ角的掃描，即可在整個(gè)元素范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)連續(xù)測(cè)量。

②隨機(jī)引物法。隨機(jī)引物是指含有各種可能排列順序的寡聚核苷酸片斷的混合物，因此它可以與任意核苷酸序列雜交，起到聚合酶反應(yīng)的引物作用。將待標(biāo)記的DNA探針片斷變性后與隨機(jī)引物一起雜交，然后以此雜交的寡聚核苷酸為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶I大斷段（KlenowFragment）催化下，合成與探針DNA互補(bǔ)的DNA鏈，當(dāng)在反應(yīng)體系中含有a-32P-dNTP時(shí)，即形成放射性同位素標(biāo)記的DNA探針。具有上述優(yōu)點(diǎn)，可代替缺口平移法。此外大小、單雙DNA均可標(biāo)記，標(biāo)記均勻，標(biāo)記率高，但也不能標(biāo)記環(huán)狀DNA。隨機(jī)引物法標(biāo)記探針一般長400~600bp。電子探針又稱微區(qū)X射線光譜分析儀、X射線顯微分析儀。金山區(qū)優(yōu)勢(shì)探針推薦貨源

分析元素從原子序數(shù)3（鋰）至92（鈾）。感量可達(dá)10-14至10-15g。徐匯區(qū)挑選探針推薦貨源

DNA探針根據(jù)其來源分為3種：一種來源于基因組中的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe），可以是基因的全序列，或者基因上的一段序列；另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針，稱為cDNA探針（cDNA probe）；此外，還可在體外人工合成20～50個(gè)堿基的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段，稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細(xì)菌為例，細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個(gè)基因。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針，通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫的辦法，即將細(xì)菌DNA切成小片段后（如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解）分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫，然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選，產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除，***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。徐匯區(qū)挑選探針推薦貨源

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