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特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針。RNA探針用途很廣,也容易獲得,但其不穩(wěn)定性限制了其商業(yè)用途。cDNA探針的獲得是,將特定的基因片段裝載到質(zhì)粒或噬菌體中,經(jīng)過擴(kuò)增、酶切、純化等復(fù)雜的步驟,才能得到一定長(zhǎng)度的cDNA探針。這一過程比較復(fù)雜,有相應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下,由核酸合成儀來完成,可廉價(jià)獲得大量的此類探針。質(zhì)量也相對(duì)來說更為穩(wěn)定。由于cDNA探針長(zhǎng)度通常為數(shù)百至數(shù)千個(gè)堿基,所以有良好的信號(hào)放大作用,但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)堿基,滲透性強(qiáng),但信號(hào)放大作用則較差,合成的多相寡核苷酸探針,敏感性可以達(dá)到cDNA探針?biāo)健k娮犹结樅蛼呙桦婄R在電子光學(xué)系統(tǒng)的構(gòu)造基本相同,它們常常組合成單一的儀器。黃浦區(qū)挑選探針現(xiàn)價(jià)
電子探針(Electron Probe Microanalysis)是一種利用電子束作用樣品后產(chǎn)生的特征X射線進(jìn)行微區(qū)成分分析的儀器, [1]可以用來分析薄片中礦物微區(qū)的化學(xué)組成。除H、He、Li、Be等幾個(gè)較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進(jìn)行定性和定量分析。電子探針的大批量是利用經(jīng)過加速和聚焦的極窄的電子束為探針,激發(fā)試樣中某一微小區(qū)域,使其發(fā)出特征X射線,測(cè)定該X射線的波長(zhǎng)和強(qiáng)度,即可對(duì)該微區(qū)的元素作定性或定量分析。電子探針顯微分析原理及其發(fā)展的初期是建立在X射線光譜分析和電子顯微鏡這兩種技術(shù)基礎(chǔ)上的,該儀器實(shí)質(zhì)上就是這兩種儀器的科學(xué)組合。黃浦區(qū)挑選探針現(xiàn)價(jià)利用特征波長(zhǎng)來確定元素的儀器叫做波長(zhǎng)色散譜儀(波譜儀),利用特征能量的就稱為能量色散譜儀(能譜儀)。
血凝素與生物素有非常高的親和性,當(dāng)血凝素標(biāo)記上過氧化物酶或堿性磷酸酶,經(jīng)雜交反應(yīng)**終形成探針-生物素-血凝素酶復(fù)合物(ABC法),酶催化底物顯色,觀察結(jié)果。ABC法底物顯色生成不溶物,以便觀測(cè)結(jié)果。酶標(biāo)記法復(fù)雜、重復(fù)性差,成本高,但便于運(yùn)輸、保存,靈敏度與放射物標(biāo)記法相當(dāng)。探針標(biāo)記方法①缺口平移標(biāo)記法。利用的是DNA聚合酶I能修復(fù)DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機(jī)切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同時(shí)在3´端修復(fù)加入被標(biāo)記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、比活性相對(duì)較高、標(biāo)記均勻,多用于大分子DNA標(biāo)記,(>1000bp比較好),但單鏈DNA、RNA不能用該法標(biāo)記。
缺口平移法是**常用的探針標(biāo)記法,反應(yīng)體系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸、一種同位素標(biāo)記的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如圖1。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機(jī)切開若干個(gè)缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓缓笤俳柚贒NA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同時(shí)又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動(dòng),DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。由于反應(yīng)體系中含有同位素標(biāo)記的單核苷酸,使新合成的鏈帶有同位素標(biāo)記,所以缺口平移實(shí)際上是同位素標(biāo)記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸。主要用來分析固體物質(zhì)表面的細(xì)小顆粒或微小區(qū)域,小范圍直徑為1μm左右。
3 面分析用于測(cè)定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測(cè)量的某元素特征X射線信號(hào)的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時(shí)在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強(qiáng)度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時(shí),先測(cè)得試樣中Y元素的特征X射線強(qiáng)度IY,再在同一條件下測(cè)出已知純?cè)豗的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線強(qiáng)度IO。然后兩者分別扣除背底和計(jì)數(shù)器死時(shí)間對(duì)所測(cè)值的影響,得到相應(yīng)的強(qiáng)度值IY和IO,兩者相除得到X射線強(qiáng)度之比KY= IY / IO。 直接將測(cè)得的強(qiáng)度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進(jìn)行三種效應(yīng)的修正。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,熒光效應(yīng)修正。經(jīng)過修正,誤差可控制在±2%以內(nèi)。電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學(xué)顯微鏡。上海質(zhì)量探針維修價(jià)格
近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀察微區(qū)形貌的同時(shí)逐點(diǎn)分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。黃浦區(qū)挑選探針現(xiàn)價(jià)
探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),便于標(biāo)記。特點(diǎn)是比活性高,可達(dá)9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時(shí)間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測(cè)定ELISA方法相似,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,事實(shí)上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標(biāo)記的。黃浦區(qū)挑選探針現(xiàn)價(jià)
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