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第二,數(shù)據(jù)庫(kù)的建立。盡管當(dāng)前空間轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)在快速地增長(zhǎng),但尚未有對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總集成。第三,研究物種及組織的多樣化。在當(dāng)前時(shí)代,除 LCM 之外,研究的***主要集中于人類(lèi)和小鼠的大腦,而其他***(例如肝臟)的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究相對(duì)滯后。對(duì)除人類(lèi)和小鼠以外的其他生物以及除大腦以外的其他***的技術(shù)現(xiàn)代化,將為開(kāi)發(fā)有用的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)地圖集提供廣闊的前景。第四,集成度高、交互性強(qiáng)、易擴(kuò)展、文檔信息完善的開(kāi)源工作流程的開(kāi)發(fā)。該類(lèi)工具的開(kāi)發(fā)將簡(jiǎn)化不同類(lèi)型空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的整合和分析。HE 染色適用于空間轉(zhuǎn)錄組的組織學(xué)呈現(xiàn)方法。北京空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
廣義上來(lái)說(shuō),目前一共有4種解析“空間性轉(zhuǎn)錄組”的策略:2.第一種是利用計(jì)算機(jī)算法,根據(jù)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)來(lái)模擬重構(gòu)組織的空間形態(tài)。例如Seurat,這是一個(gè)在單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析中***用到的R包,我們可以利用scRNA-seq數(shù)據(jù),加上對(duì)markegene進(jìn)行原位測(cè)序的結(jié)果來(lái)重構(gòu)組織的空間信息。3.第二種,激光顯微切割+二代測(cè)序(LCM+NGS)。這種技術(shù)對(duì)儀器和實(shí)驗(yàn)人員的操作要求較高,而且獲取的通量也比較低,如果組織非常珍貴或者研究的內(nèi)容十分精細(xì),可以考慮這個(gè)。但是這種策略比較難被官方干運(yùn)用。4.第三種策略,就是基于高分辨圖像的原位測(cè)序。**經(jīng)典的是smFISH當(dāng)然,這種方法的通量比較低。當(dāng)然隨著技術(shù)的發(fā)現(xiàn),剛發(fā)布的FISH-seq技術(shù)通過(guò)多輪雜交的方式,已經(jīng)把測(cè)序通量提高到了10000+個(gè)轉(zhuǎn)錄本。5.***就是“基于空間條形碼(spatialbarcodes)的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。本文主要討論的也就是這種技術(shù)。后面主要討論的都是基于這種策略。 湖南空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)作者通過(guò)對(duì)三個(gè)人類(lèi)腦皮層組織的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,可評(píng)估不同腦皮層區(qū)域中基因表達(dá)特征和細(xì)胞類(lèi)型定位情況。
基于原位測(cè)序的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。基于原位測(cè)序(ISS)的方法通過(guò)測(cè)序產(chǎn)生空間轉(zhuǎn)錄組信息,這種方法只依靠連接酶連接兩段DNA—一段已知序列的引物和一個(gè)探針與模板匹配,不匹配的探針就會(huì)被洗掉。2013年開(kāi)發(fā)的ISS中,每個(gè)探針使用一個(gè)查詢(xún)堿基來(lái)測(cè)序基因條形碼。FISSEQ和后來(lái)的EXeq使用了SOLiD,每個(gè)探針使用兩個(gè)查詢(xún)堿基來(lái)測(cè)序環(huán)化和RCA擴(kuò)增的cDNAs。在STARmap中,基因條形碼由SEDAL測(cè)序,其中還使用了兩個(gè)類(lèi)似固體的查詢(xún)堿基來(lái)避免錯(cuò)誤。BARseq還用基因條形碼放大了RCA探針。基于ISS技術(shù)的優(yōu)勢(shì)包括:?jiǎn)渭?xì)胞分辨率、亞細(xì)胞轉(zhuǎn)錄物定位和可應(yīng)用于更大的組織區(qū)域。缺點(diǎn)是:檢測(cè)效率較低。
空間轉(zhuǎn)錄組的一般流程2。這使得在后續(xù)步驟中覆蓋細(xì)胞組織圖像和基因表達(dá)數(shù)據(jù)成為可能。用我們的滲透試劑對(duì)組織進(jìn)行滲透,這意味著在細(xì)胞膜上形成小孔。RNA分子可以通過(guò)這些通道離開(kāi)細(xì)胞,并與芯片上相鄰的捕獲探針結(jié)合。因此,基因表達(dá)信息被捕獲在芯片上。需要通過(guò)以下步驟將捕獲的RNA分子中存儲(chǔ)的信息轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)。cDNA合成是為了創(chuàng)造穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。這是必要的,因?yàn)閏dna - rna -雜交體的降解速度很快。此外,這是構(gòu)建可測(cè)序文庫(kù)之前的必要步驟。所有之前收集的信息都被匯集起來(lái),可以在線訪問(wèn)。這意味著在實(shí)踐中,您可以查看組織切片的圖像并選擇組織中的不同區(qū)域。然后你可以確定哪些基因在這些區(qū)域中以什么數(shù)量表達(dá)。因此,你可以在一個(gè)單一的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行新分析。獲取空間轉(zhuǎn)錄組中各個(gè)spot的細(xì)胞類(lèi)型注釋信息。
1. 10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息;組學(xué)板塊包括cDNA的合成、擴(kuò)增、接頭連接和測(cè)序,記錄切片的轉(zhuǎn)錄本信息和空間位置信息 。10X Genomics 繼單細(xì)胞測(cè)序后也推出了空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)。重慶空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量
許多當(dāng)前時(shí)代空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的基礎(chǔ)都是在自七十年代以來(lái)的幾十年間建立的。北京空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)(ST)是一種方法,允許在組織樣本中可視化和定量分析轉(zhuǎn)錄組與空間分辨率。通過(guò)在載玻片上排列含有位置條形碼的寡核苷酸的組織切片,該方法聲稱(chēng)可以生成具有精確位置信息的高質(zhì)量的RNA-seq cDNA文庫(kù)。條形碼芯片有1007個(gè)帶有獨(dú)特條形碼序列的引物位點(diǎn)。每個(gè)位置都有一個(gè)直徑100μm(對(duì)應(yīng)于一個(gè)組織域)中心到中心的距離是200μm。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),在空間轉(zhuǎn)錄組樣本處理、實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)挖掘上的成功經(jīng)驗(yàn),致力通過(guò)質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。北京空間轉(zhuǎn)錄組報(bào)價(jià)
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司位于聯(lián)航路1188號(hào)25幢,擁有一支專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。致力于創(chuàng)造***的產(chǎn)品與服務(wù),以誠(chéng)信、敬業(yè)、進(jìn)取為宗旨,以建歐易生物產(chǎn)品為目標(biāo),努力打造成為同行業(yè)中具有影響力的企業(yè)。我公司擁有強(qiáng)大的技術(shù)實(shí)力,多年來(lái)一直專(zhuān)注于檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng),具體經(jīng)營(yíng)項(xiàng)目以相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))一般項(xiàng)目:生物醫(yī)藥產(chǎn)品、生化產(chǎn)品的研發(fā),醫(yī)藥中間體、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)品化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、易制毒化學(xué)品)的研發(fā)、銷(xiāo)售,儀器儀表的銷(xiāo)售,并提供相關(guān)技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)服務(wù),會(huì)務(wù)服務(wù),企業(yè)管理咨詢(xún)。的發(fā)展和創(chuàng)新,打造高指標(biāo)產(chǎn)品和服務(wù)。自公司成立以來(lái),一直秉承“以質(zhì)量求生存,以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念,始終堅(jiān)持以客戶(hù)的需求和滿(mǎn)意為重點(diǎn),為客戶(hù)提供良好的科研服務(wù),科研檢測(cè),學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢(xún),從而使公司不斷發(fā)展壯大。