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這些熒光微球正廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的多個(gè)領(lǐng)域中,如: (1)細(xì)胞表面抗原的檢測(cè),包括CD4/CD8表面抗原的***計(jì)數(shù);細(xì)胞表面低豐度表達(dá)受體的分析;骨髓移植受體內(nèi)供體紅細(xì)胞的檢測(cè);白色***抗原檢測(cè)等。 (2)退行性神經(jīng)病變示蹤物,熒光微球具有***、與神經(jīng)細(xì)胞結(jié)合時(shí)間長(zhǎng)以及受注射部位影響極小的特點(diǎn)。 (3)吞噬功能的檢測(cè),0.6~2.0μm大小的熒光微球適合于這一類(lèi)的研究,如分析大鼠中性粒細(xì)胞、人橫紋導(dǎo)管細(xì)胞、小鼠腹膜巨噬細(xì)胞、人多核白細(xì)胞的吞噬功能或不同調(diào)理素調(diào)理作用對(duì)吞噬功能的影響等。 (4)血流分析,10-15 μm大小7種顏色的熒光可供研究組織中局部血流情況,如**脈管血流速率、視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜循環(huán)、肺泡微管的功能直徑定位等。 (5)敏感性診斷試劑,如替代一些已開(kāi)展應(yīng)用的微球診斷試驗(yàn):膠乳凝集試驗(yàn)、微球捕獲ELASA、雙位點(diǎn)夾心法等,它較傳統(tǒng)比色方法更為靈敏;另有新近誕生的流式微球分析技術(shù)(Cytometric Bead Array CBA)通過(guò)將不同熒光強(qiáng)度的聚苯乙烯微球包被上多種高特異性的單克隆抗體,在微球“三明治”平臺(tái)上進(jìn)行可溶性蛋白的檢測(cè),由此而使得1份微量標(biāo)本可同時(shí)1次定量分析多種可溶性蛋白,**節(jié)約了樣本量和操作時(shí)間,靈敏度也較傳統(tǒng)的ELISA濟(jì)南口碑好羧基微球
一個(gè)乒乓球直徑40毫米,重量2-3克。如果把乒乓球做到直徑40納米微球,由于1毫米是106納米,
因此一個(gè)普通乒乓球就可以做出1018個(gè)直徑40納米微球。其表面積有5000多平米,相當(dāng)與5個(gè)足
球場(chǎng)大小,同樣重量的40納米微球與40毫米乒乓球相比表面積增加了1012倍,因此納米微球
表面吸附能力也增加了1012倍。當(dāng)尺寸變小,表面吸附能力大幅度增加還是一個(gè)物理量變的過(guò)程,
而某些物質(zhì)小到一定程度時(shí),其性能還會(huì)出現(xiàn)質(zhì)的變化。比如說(shuō)量子點(diǎn)就是有一類(lèi)物質(zhì)當(dāng)尺寸小到
納米尺度時(shí),這些物質(zhì)就會(huì)發(fā)生質(zhì)的變化,由原本不發(fā)光的物質(zhì)變成會(huì)發(fā)光的物質(zhì),而且發(fā)光的顏
色或波長(zhǎng)與尺寸還有關(guān)系。因此只要控制這些物質(zhì)的尺寸就可以控制這類(lèi)物質(zhì)的發(fā)光波長(zhǎng)。材質(zhì)不
變,只依靠尺寸的變化就可以改變其性能的巨大變化就是納米技術(shù)領(lǐng)域興起的重要原因之一。另外
一個(gè)案例也可以說(shuō)明這個(gè)問(wèn)題。一個(gè)普通塑料(聚苯乙烯)組成的微球,當(dāng)其尺寸與光的波長(zhǎng)相當(dāng)
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如何制作納米微球呢?
離子交聯(lián)法是制作納米微球的基本方法之一,適用于以殼聚糖、海藻酸鈉等
為材料的納米微球。其主要原理是作為***載體的材料通過(guò)離子交聯(lián)法從乳
液中析出,同時(shí)通過(guò)氫鍵相互作用和疏水相互作用將***包埋在載體中,從
而制備成載藥微球。該方法制備條件溫和,整個(gè)過(guò)程不使用對(duì)人體有害的試
劑,也成為載藥微球的理想制備方法之一。
納米微球的典型制備方法還有“乳化-溶劑揮發(fā)法”和“微流控法”?!叭?br/>
化-溶劑揮發(fā)法”是將模型***先溶解于有機(jī)溶劑中,然后滴加到含有表面活
性劑的水相中,在均質(zhì)機(jī)的高速剪切下形成油相/水相型乳液,再通過(guò)常壓或減
壓方式除去乳液分散相中的揮發(fā)性有機(jī)溶劑,使納米粒硬化,***通過(guò)冷凍干
燥從水性混懸液中收集納米粒。“微流控法”是一種在微米尺度的通道中操
控兩種或幾種互不相溶的微小體積液體,連續(xù)、可控地生產(chǎn)具有高度單分散尺
膠乳顆粒****比濁法(PETIA)分為兩種。一種是散射比濁檢測(cè)法;另一種是透射比濁檢測(cè)法。這兩種方法的基本原理都是在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)抗體或抗原,當(dāng)交聯(lián)有抗體或抗原的微球與抗原或抗體結(jié)合后,在短時(shí)間內(nèi)會(huì)迅速聚集在一起,改變了反應(yīng)液的散光性能或透光性能。而且,反應(yīng)液散光性能或透光性能(即吸光度)的改變與被測(cè)抗原或抗體的濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性,在一定范圍內(nèi)可以反映被測(cè)物的濃度。 目前市場(chǎng)上采用免疫比濁法的膠乳免疫比濁試劑產(chǎn)品有:(1)腦肭肽檢測(cè)試劑;(2)α1-微球蛋白檢測(cè)試劑;(3)糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑;(4)脂蛋白a?檢測(cè)試劑;(5)高敏C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑;(6)C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑;(7)抗鏈球菌溶血素“O”檢測(cè)試劑;(8)視黃醇結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑;(9)類(lèi)風(fēng)濕因子檢測(cè)試劑;(10)β2-微球蛋白檢測(cè)試劑;(11)中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白檢測(cè)試劑;(12)D-二聚體檢測(cè)試劑;(13)CK-MB?檢測(cè)試劑;(14)胱抑素C?檢測(cè)試劑;(15)肌紅蛋白檢測(cè)試劑;(16)甲胎蛋白檢測(cè)試劑;(17)肌鈣蛋白檢測(cè)試劑;(18)心型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑;等等。
包埋法方法簡(jiǎn)單,由于適用的多為水溶性天然高分子,因此其生物相容性好,表面富含多種功能基團(tuán),容易直接偶聯(lián)生物大分子,但是其主要缺點(diǎn)是制備的微球粒徑分布寬,形狀不規(guī)則,磁粒子在不同微粒內(nèi)含量不均一,各微球磁響應(yīng)能力差別大,在外環(huán)境中易發(fā)生磁泄漏。而且包覆的殼層中難免會(huì)有些乳化劑之類(lèi)的雜質(zhì),使其在生物醫(yī)用等領(lǐng)域的應(yīng)用受到一定的限制。
2.2原位法
原位法是一種制備彌散型結(jié)構(gòu)磁性高分子復(fù)合微球的方法,該方法主要步驟如下:首先制備出多孔型高分子微球,然后通過(guò)磺化或硝化處理,使高分子微球能與鐵、猛、鈷等金屬離子具有親和性,***將制備的微球中加入鐵鹽,在堿性條件氧化沉淀鐵離子,使得磁性粒子在高分子微球的孔中生成,**終得到磁性復(fù)合微球。Ugelstad等釆用此法制備出磁性高分子微球且開(kāi)發(fā)了一系列已商品化的產(chǎn)品(Dynabeeds),并在微生物免疫學(xué)、分子生物學(xué)和**等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。
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膠乳顆粒****比濁法 膠乳顆粒****比濁法(PETIA)分為兩種。一種是散射比濁檢測(cè)法;另一種是透射比濁檢測(cè)法。這兩種方法的基本原理都是在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)抗體或抗原,當(dāng)交聯(lián)有抗體或抗原的微球與抗原或抗體結(jié)合后,在短時(shí)間內(nèi)會(huì)迅速聚集在一起,改變了反應(yīng)液的散光性能或透光性能。而且,反應(yīng)液散光性能或透光性能(即吸光度)的改變與被測(cè)抗原或抗體的濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性,在一定范圍內(nèi)可以反映被測(cè)物的濃度。 濟(jì)南口碑好羧基微球
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