PCR常使用目標(biāo)序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來(lái)體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程所用試劑的兼容性較好，在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對(duì)相同樣品檢測(cè)時(shí)，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問(wèn)題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個(gè)微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評(píng)估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測(cè)量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn)，在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn)。dPCR在同一陣列上同時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí)，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)字以靈敏度和準(zhǔn)確度測(cè)量突變的變異程度、檢測(cè)稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數(shù)變?異狀態(tài)。法國(guó)一體化數(shù)字PCR
在熒光定量PCR應(yīng)用已經(jīng)如此的情況下，緣何數(shù)字PCR仍然能橫空出世？中心點(diǎn)在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場(chǎng)應(yīng)用提供了非常重要的檢測(cè)工具支撐，但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，屬于相對(duì)定量，操作較為復(fù)雜，且終端用戶對(duì)其結(jié)果的重復(fù)性、靈敏性、精密度、分辨率、對(duì)PCR反應(yīng)抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數(shù)字PCR通過(guò)將反應(yīng)體系進(jìn)行有限稀釋至成千上萬(wàn)的反應(yīng)單元中，實(shí)現(xiàn)了核酸靶標(biāo)的單分子擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增結(jié)束后，基于終點(diǎn)法對(duì)陽(yáng)性液滴數(shù)和總液滴數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)合泊松分布原理，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始樣本的定量。其極大地簡(jiǎn)化了操作步驟，并且大幅提高了檢測(cè)性能，尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測(cè)上（靈敏性可達(dá)0.001-0.0001%），其優(yōu)異的性能得到了終端用戶的認(rèn)可。廣東進(jìn)口數(shù)字PCR價(jià)格數(shù)字PCR技術(shù)min檢測(cè)下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。
ThermoFisherQuantStudio3D是另一個(gè)經(jīng)典的芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)，其基本的檢測(cè)流程是：將反應(yīng)液加入到涂布器中，通過(guò)涂布器將反應(yīng)液均勻涂布在有20000個(gè)微孔的芯片上，將芯片放在PCR儀上擴(kuò)增，將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。操作較為復(fù)雜，整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。STILLANaica是一個(gè)較新的數(shù)字PCR平臺(tái)，基本的檢測(cè)流程是：將反應(yīng)液加入芯片，將芯片放入微滴生成擴(kuò)增系統(tǒng)，生成30,000個(gè)微滴單層平鋪于芯片中，PCR擴(kuò)增在芯片上完成。然后將擴(kuò)增后的芯片轉(zhuǎn)移至微滴閱讀分析系統(tǒng)，采取拍照的方式讀取熒光信號(hào)。由于整個(gè)過(guò)程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。
盡管我國(guó)dPCR行業(yè)起步較晚，但在國(guó)家鼓勵(lì)醫(yī)療器械創(chuàng)新的大背景下，以及精細(xì)醫(yī)療和個(gè)性化用藥等需求推動(dòng)下，dPCR成為了近年廣受關(guān)注的熱點(diǎn)領(lǐng)域，保持著穩(wěn)定快速的增長(zhǎng)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)誕生了如領(lǐng)航基因、新羿生物、銳訊生物、科維思、永諾生物、泛生子、思納福醫(yī)療等企業(yè)，開(kāi)始與國(guó)外企業(yè)同臺(tái)競(jìng)技。從市場(chǎng)角度看，北美依然是dPCR比較大的主導(dǎo)市場(chǎng)，其次是亞洲和歐洲。由于性疾病和的高發(fā)病率以及患者對(duì)這些疾病的早期診斷意識(shí)的提高，亞太地區(qū)將成為dPCR增長(zhǎng)速度快的市場(chǎng)。伯樂(lè)、凱杰、賽默飛、羅氏、因美納等公司紛紛通過(guò)收購(gòu)、投資等方式布局dPCR業(yè)務(wù)。楊雁峰博士堅(jiān)信數(shù)字PCR是可以應(yīng)用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術(shù)之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。
dPCR在使用過(guò)程中需要特別注意體積誤差造成的結(jié)果偏差。體積誤差對(duì)于測(cè)量拷貝數(shù)濃度會(huì)產(chǎn)生偏差。目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學(xué)顯微鏡觀測(cè)為主。分散體積的差異會(huì)增加拷貝數(shù)結(jié)果的不確定性，Emslie等使用光學(xué)顯微鏡縱向拍照比較圖片邊緣的微小差異，考察了數(shù)字PCR系統(tǒng)中每個(gè)微孔內(nèi)和孔與孔間的體積差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度。Corbisier等使用微滴數(shù)字PCR對(duì)6種不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)棉籽粉質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[ERM-AD623a-f，濃度范圍（10~10）copies/ul]進(jìn)行分析，優(yōu)化了液滴體積得到相應(yīng)校正因子，并使用該校正因子發(fā)現(xiàn)并校準(zhǔn)了運(yùn)行軟件中液滴體積不變的假設(shè)而引起的數(shù)據(jù)偏離，數(shù)據(jù)結(jié)果的一致性有明顯提高。通過(guò)不同cluster的位置進(jìn)行突變位點(diǎn)的判斷時(shí)存在誤判的現(xiàn)象。廣州全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR系統(tǒng)
數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。法國(guó)一體化數(shù)字PCR
在定量PCR時(shí)，我們常常糾結(jié)一個(gè)問(wèn)題，究竟是相對(duì)定量還是***定量呢？如今，你無(wú)需糾結(jié)了，因?yàn)閿?shù)字PCR（digitalPCR）來(lái)了。盡管這兩種技術(shù)有些類似，都是估計(jì)起始樣品中的核酸量，但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來(lái)測(cè)定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，是對(duì)起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。法國(guó)一體化數(shù)字PCR
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房，擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。在雙螺旋科學(xué)儀器近多年發(fā)展歷史，公司旗下現(xiàn)有品牌臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia等。公司堅(jiān)持以客戶為中心、儀器儀表批發(fā);商品批發(fā)貿(mào)易（許可審批類商品除外）;商品零售貿(mào)易（許可審批類商品除外）;教學(xué)設(shè)備的研究開(kāi)發(fā);辦公設(shè)備耗材批發(fā);生物技術(shù)開(kāi)發(fā)服務(wù);生物技術(shù)推廣服務(wù);計(jì)算機(jī)批發(fā);生物技術(shù)轉(zhuǎn)讓服務(wù);農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;水處理設(shè)備的研究、開(kāi)發(fā);食品科學(xué)技術(shù)研究服務(wù);環(huán)保設(shè)備批發(fā);辦公設(shè)備批發(fā);市場(chǎng)為導(dǎo)向，重信譽(yù)，保質(zhì)量，想客戶之所想，急用戶之所急，全力以赴滿足客戶的一切需要。自公司成立以來(lái)，一直秉承“以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念，始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn)，為客戶提供良好的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀，從而使公司不斷發(fā)展壯大。