對于檢測需要高靈敏度以及技術確認的情況下，數字PCR技術也可以發(fā)揮重要作用。技術數據表明，數字PCR技術對的比較低檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。經測試，數字PCR在檢測和診斷的某些方面優(yōu)于金標準qPCR，尤其是在低病毒載量樣本中，相比起qPCR，數字PCR特異性、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測限受影響更小。因此，未來預計數字PCR技術也將在類疾病中得到更加廣的應用。數字PCR的應用甚廣，除了可應用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。通過數字PCR技術可建立多重熒光體系，用于同時檢測比如非小細胞肺中常見的MET和HER2耐藥擴增。有研究報道，使用數字PCR技術對436例非小細胞肺樣品進行檢測，并挑選樣本驗證了數字PCR與RNA fish的檢測一致性。結果表明，該數字PCR技術在保證了基因擴增檢測準確性的同時，還節(jié)約了檢測時間。dPCR被稱作第三代PCR技術，但dPCR技術的廣泛應用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。上海一體化數字PCR分析應用
作為時下的熱點技術，數字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應單元（nL，納升級別）中，使得每個反應單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎上進行擴增、檢測和分布統(tǒng)計，從而實現(xiàn)靶標分子的比較 計數。（圖：數字PCR技術原理）根據微反應單元的不同形式，數字PCR產品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數字PCR產品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術相比，數字PCR具有很多優(yōu)勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內參和標準曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標；三是微反應單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產物間的相互干擾，準確度和可重復性較高。蘇州微滴式數字PCR熒光通道數字PCR是直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的定量。
引物設計（DesignPrimers）：引物長度（PrimerLength）：18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結合，但過短的引物也更可能同基因組上的多個區(qū)域相結合而產生非特異性擴增產物。更長的引物會提高同靶序列結合的特異性，但過長的引物（>30bp）同靶序列結合速度變慢，降低結合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數量的百分比，該值應在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物。
Drop-off實驗包括兩個針對相同擴增子的TaqMan探針：與野生型序列互補而與突變位點不發(fā)生互補的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標雜交，產生雙重陽性信號（如圖1B，藍色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標基因進行退火，從而得到一個陽性信號。相同模板進行 96 次擴增，終點處產物量不恒定，但 Ct 值卻極具重現(xiàn)性。
在使用dPCR進行轉基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術對相同樣品檢測時，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個微單元）芯片數字PCR分析儀測定標準物質ERM-AD413檢測轉基因玉米MON810。該小組應用dPCR技術評估在qPCR定義下的靈敏度數值，在拷貝數200-700之間，dPCR與qPCR的測量結果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數200時有被低估的風險，在高于拷貝數1000時有被高估的風險。dPCR在同一陣列上同時測量轉基因和內源性靶點時，需要稀釋內源性靶點和轉基因靶點在合理拷貝數范圍內以保證dPCR測量結果的準確性。臻準推出新款數字PCR產品：AccuONE2.0數字PCR系統(tǒng)。上海一體化數字PCR分析應用
數字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。上海一體化數字PCR分析應用
全自動樣本制備系統(tǒng)DMX-1000配備氣流發(fā)生裝置和氣壓控制裝置，能夠實現(xiàn)高精度壓力控制，結合**產品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術，DMX-1000可以在70秒內快速、穩(wěn)定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數量可達2萬-60萬個，粒徑范圍30-120μm，性能穩(wěn)定。除此之外，銳訊還提供微流控芯片的定制服務，以滿足不同的液滴數目和尺寸要求。平板式快速擴增儀TC-1000，不再使用傳統(tǒng)的96孔板，而是特制的液滴擴增芯片；不再是傳統(tǒng)的“燒開水”加熱模式，代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式。在這樣的改進之下，TC-1000完成40個PCR循環(huán)只需約45分鐘（TC-2.0升級版更是把時間縮短到了25分鐘?。?，大幅縮短了等待時間，提升了實驗進度。這對實驗人員而言，無疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——愛工作，也愛生活。上海一體化數字PCR分析應用
廣州雙螺旋科學儀器有限公司在數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀一直在同行業(yè)中處于較強地位，無論是產品還是服務，其高水平的能力始終貫穿于其中。公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房，成立于2015-04-17，迄今已經成長為精細化學品行業(yè)內同類型企業(yè)的佼佼者。雙螺旋科學儀器以數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀為主業(yè)，服務于精細化學品等領域，為全國客戶提供先進數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀。多年來，已經為我國精細化學品行業(yè)生產、經濟等的發(fā)展做出了重要貢獻。