熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的培養(yǎng)動植物細胞以及植物細胞原生質(zhì)體的生活力鑒定染料，其染色機理也利用了死活細胞在代謝上的差異：FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無極性，能自由滲透出入完整的細胞膜。
當(dāng)FDA進入活細胞后，被細胞內(nèi)的脂酶分解，生成有極性的、能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)——熒光素，該物質(zhì)不能自由透過活的細胞膜，積累在細胞膜內(nèi)，因而使有活力的細胞產(chǎn)生綠色熒光；而無活力的細胞因不能使FDA分解，而無法產(chǎn)生熒光。
除此之外，還有一些細胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細胞液泡著紅色，而細胞質(zhì)和細胞核不被著色；死細胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個細胞中，細胞核和細胞質(zhì)被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用，如甲基藍-中性紅混合染色法。 全自動細胞計數(shù)儀的缺點。河北高科技細胞計數(shù)儀咨詢報價
細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總
一般拿到細胞后，應(yīng)該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。
何時須更換培養(yǎng)基?
視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。
細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。 北京定制細胞計數(shù)儀比較價格細胞計數(shù)儀的使用評價。
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貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。
細胞抱團怎么處理?
一些懸浮細胞抱團生長是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團，需要大家酌情而定)。 細胞計數(shù)儀有那些廠商？
單細胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭毎麘乙旱闹苽?，而懸液制備中細胞計?shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量，但是關(guān)于細胞計數(shù)您真的了解嗎？
目前細胞計數(shù)主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1）臺盼藍染色原理：臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高，可使染料進入細胞內(nèi)而使細胞著色（藍色）。
2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入所有死細胞的細胞核，呈現(xiàn)紅色熒光。
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