單細胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭毎麘乙旱闹苽?，而懸液制備中細胞計?shù)的準確性直接影響單細胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量，但是關(guān)于細胞計數(shù)您真的了解嗎？
目前細胞計數(shù)主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1）臺盼藍染色原理：臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高，可使染料進入細胞內(nèi)而使細胞著色（藍色）。
2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入所有死細胞的細胞核，呈現(xiàn)紅色熒光。
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染色法鑒定機理
染色法分化學染色法和熒光染色法，根據(jù)染色機理的不同，染料或使死細胞著色，或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異主要包括：
死活細胞細胞膜通透性的差異：
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過；而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。
臺盼藍，又稱錐藍，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色，而活細胞不被著色 廣東優(yōu)勢細胞計數(shù)儀定制價格全自動細胞計數(shù)儀的對比數(shù)據(jù)。
一般拿到細胞后，應(yīng)該注意什么？
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張），排除細胞本身污染的情況。
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細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總
貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 全自動細胞計數(shù)儀的缺點。
培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細胞。
CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。
希望能幫到大家。
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細胞接種密度多少合適?
依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。
如何預(yù)防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?
掌握細胞傳代的比較好時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到比較好;嚴格控制水質(zhì)和器皿的清潔。 浙江推廣細胞計數(shù)儀咨詢問價
上海拓開生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè)，積極探索行業(yè)發(fā)展，努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。上海拓開是一家有限責任公司企業(yè)，一直“以人為本，服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司業(yè)務(wù)涵蓋葡萄糖乳酸分析儀，生化分析儀，智能控制系統(tǒng)，細胞計數(shù)儀，價格合理，品質(zhì)有保證，深受廣大客戶的歡迎。上海拓開將以真誠的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品，為彼此贏得全新的未來！