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無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法:1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,立即放入37℃振動(dòng)水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4.清洗細(xì)胞,充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6.鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要來(lái)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)??梢苑乐够驕p少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。金華廣州無(wú)血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞凍存:細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中,在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi),而且細(xì)胞一旦離開(kāi)活的開(kāi)始原代培養(yǎng),它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)-196℃,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。珠海正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液推薦廠家無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。
細(xì)胞凍存時(shí)間和操作步驟:1、首先我們需要凍存培養(yǎng)液,通常細(xì)胞凍存液含10%的DMSO,或者是甘油、10-20%的小牛血清;、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,并且還需要用PBS進(jìn)行清洗,需要注意在這里要丟棄掉舊的細(xì)胞凍存液;3.去除PBS,加入適量的胰蛋白酶,以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜,然后把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化掉;然后離心1000rpm5min時(shí)間;4、去除胰蛋白酶,加入凍存培養(yǎng)液,輕輕吹打使細(xì)胞的分布變得均勻,調(diào)節(jié)細(xì)胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml,需要注意這是較佳的細(xì)胞密度;5、將細(xì)胞裝入凍存管之中,每管的含量應(yīng)該保持在1~1.5ml之間。在凍存管上標(biāo)明細(xì)名稱、時(shí)間、操作者;6、較后要說(shuō)的就是細(xì)胞凍存的時(shí)間了,對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序來(lái)說(shuō),需要進(jìn)行梯度降溫,降溫速率-1~-2℃/min,一旦溫度達(dá)到-25℃以下時(shí),那么就可增至-5℃~-10℃/min;等到-100℃的時(shí)候,可迅速的放入到液氮之中。
細(xì)胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現(xiàn)用現(xiàn)配。除了這個(gè)方式,還可選擇20%的DMSO機(jī)上80%的小牛血清,配成兩倍的儲(chǔ)存液,在使用時(shí)細(xì)胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細(xì)胞凍存液需要注意以下幾點(diǎn):1、在使用凍存液前,需要確保細(xì)胞凍存液已經(jīng)完全融化,并要輕輕的混勻。對(duì)融化后的細(xì)胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應(yīng)該確保凍存前的細(xì)胞生長(zhǎng)情況比較良好,比如說(shuō)細(xì)胞需要處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,并且凍存的時(shí)候存活率大于90%。3、在使用細(xì)胞凍存液期間,為了保證可以發(fā)揮較佳的效果,建議將細(xì)胞凍存在液氮之中,這樣可以長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)行保存。如果說(shuō)將細(xì)胞置于-80℃的環(huán)境下保存,那么保存的時(shí)間大約為1年。4、細(xì)胞凍存液如果需要做標(biāo)記的話,要使用耐受有機(jī)溶劑的馬克筆進(jìn)行標(biāo)記,以防被酒精或異丙醇等擦掉,不能辨識(shí)。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):即用型,無(wú)需現(xiàn)配,直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可。
無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液凍存液成分。無(wú)血清細(xì)胞,無(wú)血清干細(xì)胞及MSC凍存液。保存條件:儲(chǔ)存于4℃以下。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期3年。3個(gè)月以上沒(méi)有使用凍存液計(jì)劃時(shí),盡可能冷凍保存。為避免重復(fù)凍融過(guò)程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將100ml產(chǎn)品分裝小瓶后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,細(xì)胞凍存與復(fù)蘇后,平均活細(xì)胞回收比例超過(guò)80%。與含血清凍存液比較,BI無(wú)血清凍存液細(xì)胞存活率都有較佳的表,BI無(wú)血清細(xì)胞凍存液也適用于動(dòng)物血清培養(yǎng)的細(xì)胞凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染。太原正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液推薦廠家
無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色:獨(dú)特配方有效提高細(xì)胞凍存存活率及復(fù)蘇率。金華廣州無(wú)血清細(xì)胞凍存液
通用細(xì)胞凍存液(無(wú)血清)的簡(jiǎn)介:隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展,除了原代培養(yǎng)之外,人工開(kāi)發(fā)出來(lái)的細(xì)胞系的保存越來(lái)越重要。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成,減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷,從提高細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時(shí)低溫保護(hù)劑獲得稀釋,稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜,這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Wo(hù)劑稀釋以后,該濃度一般不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損傷。通用細(xì)胞凍存液(無(wú)血清)主要由培養(yǎng)基、DMSO等組成,不含血清,是一種經(jīng)典的無(wú)菌凍存液。用于各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系、雜交瘤細(xì)胞等的凍存。金華廣州無(wú)血清細(xì)胞凍存液