細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。隨著細胞治好以及細胞儲存產(chǎn)業(yè)發(fā)展,細胞凍存也面臨從科研應用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。青島無血清細胞凍存液供應商
胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。(參考:5×105至5×106cells/ml)。3.取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min)。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時,可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。青島無血清細胞凍存液供應商無血清細胞凍存液使用方法:按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。
細胞凍存:取出凍存管,注明細胞名稱,代數(shù),日期。離心后,以無菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,根據(jù)計數(shù)結(jié)果,將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低1℃?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲存。
無血清細胞凍存液用途:1.無血清細胞凍存液用于造血干細胞、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。3.無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:1.不含牛血清,無動物源組分。傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領(lǐng)域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動物源組分。2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。為了避免反復凍融,傳統(tǒng)的細胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無血清細胞凍存液,2-8℃保存即可,無需再進行分裝。無血清細胞凍存液使用方法:取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量,置于離心管中。
復蘇方:法1)從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2)待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。3)離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4)清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。5)加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6)鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。無血清細胞凍存液不含牛血清,無動物源組份。唐山正規(guī)無血清細胞凍存液哪里買
無血清細胞凍存液存儲條件:儲存于4℃以下,質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期兩年。青島無血清細胞凍存液供應商
血清血液成分(加入抗凝劑)血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血塊收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿比較大的區(qū)別。而在凝血反應中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學成分的分析,都以血清為樣品。青島無血清細胞凍存液供應商