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以前在另一家實驗室的時候,凍存細胞根本就沒有講究這些標準操作。凍存的細胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細胞)、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細胞酶消化后直接參與離心,加入凍存液(含90%的血清和10%的DMS0),直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,較久保存,幾年后細胞的活力仍沒有什么受損,照常能復蘇,成活率高。但有三點須注意:(1)一是細胞的生長狀態(tài)要好,不能長得過稀,同樣也不能過密,細胞的狀態(tài)看起來相當健康。70%密度的要保存的細胞須再長24h才能全滿,萬一細胞狀態(tài)不好,可以酶消化后再繁殖一次;(2)凍存細胞的量要留心,不能太密也不能太稀,一般1OOmm培養(yǎng)皿的細胞凍存為3~4管;(3)存放在-80℃冰箱的時間不能過長,一兩天后轉移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細胞,半年還有30%~50%的細胞有活性,但一年的細胞就沒有活的。無血清快速細胞凍存液:減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。成都正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價
無血清快速細胞凍存液,通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。產(chǎn)品特色:1.高安全性,完全使用醫(yī)藥品等級原料進行生產(chǎn),不含動物成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質量一致性。2.細胞存活率高,無批次差異。3.完全凍存液配方,可直接使用,方便簡捷,可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)。徐州無血清細胞凍存液哪家好凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱,穩(wěn)定保存數(shù)年。
無血清快速細胞凍存液保存條件:儲存于4℃以下。質量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期2年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時,盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低,推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。無血清快速細胞凍存液細胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2、按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。3、取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min)。移去離心管中的上清液。4、加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細胞混合液。5、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6、直接將含細胞混合液的凍存管放入-70℃以下冰箱,長期冷凍保存。7、若研究者需要液氮保存時,可將完全凍結的凍存管(放入-70℃以下冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。
密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間,密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前,一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度,提高細胞的存活率。溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的關鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中,都會要求嚴格的梯度降溫,常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮,一定要避免溫度原因導致細胞自??;除非使用了成分經(jīng)過優(yōu)化、經(jīng)過嚴格測試的凍存液,才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對細胞存活的影響。凍存要求發(fā)生改變,因為凍存細胞要進行臨床應用。
細胞凍存液是如何保護細胞的:當溫度進一步下降,細胞內(nèi)外都結冰,產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑,則可保護細胞免受溶質損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結合,從而降低冰點,減少冰晶的形成,并且通過其摩爾濃度降低未結冰溶液中電解質的濃度,使細胞免受溶質損傷,細胞得以在較低溫條件下保存。在復蘇時,一般以很快的速度升溫,1-2分鐘內(nèi)即恢復到常溫,細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶,也不會暴露在高濃度的電解質溶液中過長的時間,從而無冰晶損傷和溶質損傷產(chǎn)生,凍存的細胞經(jīng)復蘇后仍保持其正常的結構和功能。無血清細胞凍存液 產(chǎn)品原理:無血清細胞凍存液,含多種保護劑成分。無錫深圳無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分。成都正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價
新常態(tài)下細胞凍存指南:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍速融,實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。典型的細胞凍存液是在生長培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清,或只是在血清中加入10%的DMSO。目前在有些實驗室中仍然采用這種自制自配的凍存液,優(yōu)點是成本低,適合自己的細胞。成都正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價