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總RNA提取試劑,適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase保護實驗,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提?。?0平方厘米細胞或100mg組織)??俁NA提取試劑注意事項:1,RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應保證無污染無RNA酶。操作中應小心,防止外源性RNA酶污染樣品導致RNA樣品降解。2,試劑中含有酚等有害物質(zhì),注意個人防護。自備新開封或?qū)iT氯仿,異丙醇,75%乙醇,DEPC處理水。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。寧波濟南RNA提取試劑
RNA的全稱是什么?核酸是一個叫米歇爾的瑞士青年化學家發(fā)現(xiàn)的,那還是1869年的事,到了1909年,一位美國生化學家又發(fā)現(xiàn)核酸中的碳水化合物有兩種核糖分子,因此核酸也有兩種,一種叫脫氧核糖酸,英文縮寫就是DNA,另一種是核糖核酸,英文縮寫是RNA。DNA一般只在細胞核中,而RNA除了在細胞核中外,還分布在細胞質(zhì)中。rna通過什么生成的?1、先是合成與RNA互補的DNA單鏈,然后DNA單鏈在DNA聚合酶的作用下繼續(xù)合成為DNA雙鏈。zhuan2、逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)是以RNA為模板shu合成DNA的過程,即RNA指導下的DNA合成。是RNA病菌的復制形式,需逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。昆明正規(guī)RNA提取試劑細胞質(zhì)和細胞核RNA提取試劑盒特點:試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA。
游離RNA(或稱循環(huán)RNA,cell-freeRNA,簡稱cfRNA),即存在于細胞外的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無創(chuàng)性診斷和研究的新分子標志物。文獻總結了以下兩個方面,一方面游離RNA主要來源于tumour細胞,另一方面tumour細胞來源有凋亡、壞死、主動釋放三種機制,目前認為以凋亡為主。游離RNA的生物學特征:游離RNA的結構RNA相對DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病癥患者血清中含有更高濃度的核糖核酸酶,病癥患者血清中以RNA-蛋白脂復合物化學組成來保護RNA,半衰期大約為2天。本試劑盒采用獨特的配方和添加劑,能高效的分離血清、血漿及其它無細胞體液等樣品中分離出游離的RNA,另外本試劑還可以有效地壓制各種外源性和內(nèi)源性的RNA酶,同時結合特制的純化柱,能較大限度的保持RNA的完整性、高得率以及純度,并能保留小RNA,為需要進行小RNA研究,如RNA的用戶提供了強有力的工具。
RNA提取試劑注意事項:1、必須戴一次性手套操作,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸TRIReagent,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,請聽取醫(yī)生意見。3、TRIReagent抽提總RNA的同時,理論上也可抽提蛋白和DNA,但未經(jīng)測試。4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細胞和組織中提取總RNA的試劑,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA;有機相用異丙醇沉淀可回收蛋白。RNA提取試劑注意事項:耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶。
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進行后續(xù)實驗,如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,NorthernBlot等。血漿/血清RNA提取試劑盒:總RNA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。重慶正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
總RNA提取試劑:適用范圍普遍,可以從動物組織。寧波濟南RNA提取試劑
Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質(zhì)。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性,經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì),進行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質(zhì)在上清液中。使用這種方法,不但能得到高質(zhì)量的RNA,而且能同時分離出細胞染色體DNA。寧波濟南RNA提取試劑