徐州濟(jì)南RNA提取試劑

總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng)：樣品用總RNA提取試劑勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前，置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA，NorthernBlot等優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。徐州濟(jì)南RNA提取試劑

RNA提取試劑注意事項(xiàng)：1、需自備氯仿，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。2、所有離心管，泵頭及相關(guān)溶液都必須無(wú)RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過(guò)夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級(jí)水中，處理過(guò)夜，滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過(guò)程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來(lái)并剪切樣品。如果不能及時(shí)抽提RNA，推薦先加入適量TRIReagent，并裂解樣品后凍存。徐州RNA提取試劑廠家供應(yīng)植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn)：操作安全可靠，無(wú)需酚抽提。

拭子RNA提取試劑的選擇？拭子樣本的量與提取的核酸量成正比，如果要提高核酸得率，也可通過(guò)增加樣本量來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本，然后進(jìn)行提取，如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果，應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率（一根口腔拭子在口咽部來(lái)回刮擦10次）在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子，Biog試劑盒的提取得率在1-4ug，基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求。

RNA的提取：眾所周知，Trizol是一種RNA提取試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分，壓制細(xì)胞釋放出核酸酶，維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性，我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻，在加入氯仿離心，這樣的話我們的RNA就進(jìn)入了水相中，再用異丙醇沉淀水相中的RNA，即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時(shí)間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點(diǎn),經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話RNA就出現(xiàn)了，分別測(cè)定吸光值A(chǔ)260和A280并計(jì)算A260/A280，就可以測(cè)定RNA的提取率了。當(dāng)然啦，我們還可以進(jìn)行深入研究，如測(cè)定Nacl的濃度，PH的大小，以及抽提時(shí)間對(duì)RNA提取率的影響啦。很多RNA也需要通過(guò)堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)行使生物學(xué)功能。

植物RNA提取：植物組織中，富含酚類化合物，或富含多糖，或含有某些尚無(wú)法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物，或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀，很難將其去除。所以我們?cè)谔崛≈参锝M織時(shí)，要選取針對(duì)植物的試劑盒，試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨，研磨過(guò)程中液氮要及時(shí)補(bǔ)充，避免樣品融化，研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻，避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本，則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量，否則組織研磨及裂解不徹底，會(huì)使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如石榴果實(shí)、西瓜果實(shí)、桃子果實(shí)等則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量（可選100~200mg）。4、植物組織，如植物葉片、根莖、堅(jiān)硬的果實(shí)等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份，再繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。常規(guī)的組織勻漿機(jī)對(duì)植物組織的勻漿效果可能不佳，一般不建議使用。拭子RNA提取試劑的選擇？離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好、裂解液細(xì)胞裂解能力強(qiáng)。蕪湖太原RNA提取試劑

植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn)：無(wú)需氯化銫梯度離心，無(wú)需氯化鋰或乙醇沉淀。徐州濟(jì)南RNA提取試劑

總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍普遍，可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會(huì)分成三層：上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無(wú)蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等徐州濟(jì)南RNA提取試劑