揚州McCoy's 5A培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時間:2023-02-16

胎牛血清都有哪些重要的指標:總蛋白含量,胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。pH值,根據(jù)藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據(jù)把進口血清和國產(chǎn)血清用7.5這個分界線界定。滲透壓,胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間。微生物,包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。關于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對血清質量影響不大,不過對于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份。揚州McCoy's 5A培養(yǎng)基

血清是細胞培養(yǎng)過程中常用的生物試劑,市面上有很多種類的血清,現(xiàn)在就來給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。透析胎牛血清是采用透析的方法,過濾去除10KDa以下的小分子(如氨基酸、核苷:次黃嘌呤和胸腺核苷等、膽固醇等),而保留血清中的大分子成分,因而可用于一些特定的細胞實驗,比如:需要避免細胞培養(yǎng)基中一些小分子干擾的實驗。使用放射性標記小分子,對生物合成過程進行監(jiān)測,以研究蛋白質等大分子的生化性質、合成、加工、細胞內傳送、分泌和降解過程。這時,常將細胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標記氨基酸(如35S標記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養(yǎng)液中進行標記。為避免外源未標記的氨基酸的干擾,這時所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。蘇州類胎牛血清Fetal Bovine Serum (Similar)由于胎牛血清與新生牛血清存在細微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。

胎牛血清給細胞提供的益處主要體現(xiàn)在6個方面:1、提供細胞生長所需的天然元素或天然的生長因子。2、提供天然的結合蛋白,能識別氨基酸、脂質、金屬離子和元素等,能結合并調節(jié)它們的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多個鈣離子結合位點,因而能調節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。3、天然含有粘附蛋白等細胞外基質成分,促進細胞的附著、鋪展。4、提供消毒功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可清理細胞生長環(huán)境中的氧自由基(·O),具有很強的抗氧化活性,可防止細胞衰老。5、提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。6、提供蛋白酶抑制劑,使細胞免受蛋白酶的損傷。因此在細胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。

胎牛血清的保存方法:1、需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清。3、胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀。胎牛血清提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他元素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。

為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因為生長因子促進細胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細胞結合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補體蛋白(補體)含量較低。這些補體具有溶解培養(yǎng)細胞和干擾免疫測定的不良作用。血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細胞在內的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進離心來制備血清。因此,與凝血相關的纖維蛋白原和蛋白質不存在于血清中。胎牛血清對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。溧陽小牛血清

進口的胎牛血清:過濾分裝前很少會反復凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的。揚州McCoy's 5A培養(yǎng)基

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?來源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采集血液獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、元素及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時,應先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,基本不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應按用量分裝并于-20℃保存,避免反復凍融。揚州McCoy's 5A培養(yǎng)基

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