胎牛血清使用中的常見問題:血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?國(guó)內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是更好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國(guó)外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價(jià)格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細(xì)胞,國(guó)產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國(guó)內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的元素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。Biochannel培養(yǎng)基價(jià)格
為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長(zhǎng)因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因?yàn)樯L(zhǎng)因子促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細(xì)胞結(jié)合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補(bǔ)體蛋白(補(bǔ)體)含量較低。這些補(bǔ)體具有溶解培養(yǎng)細(xì)胞和干擾免疫測(cè)定的不良作用。血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細(xì)胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會(huì)去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進(jìn)離心來制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。湖州哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基胎牛血清對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
進(jìn)口的胎牛血清:過濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國(guó)產(chǎn)血清,因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清,相對(duì)而言更加粘稠,顏色略深,好的血清應(yīng)是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。1、如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性,若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。2、總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。3、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。
胎牛血清作為細(xì)胞生長(zhǎng)不可缺少的重要營(yíng)養(yǎng)來源一直備受科研人員重視,那么胎牛血清在參與細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)都發(fā)揮著什么作用呢?胎牛血清,是胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、元素、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能:提供維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的元素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。胎牛血清在消化過程中提供蛋白酶抑制劑,在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
為什么血清具有批次間可變性?血清是從生物來源提取的,其成分會(huì)存在批次之間的差異。為了盡可能減少應(yīng)用變化,我們對(duì)每個(gè)批次均執(zhí)行嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè),使用高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),盡可能確保批間一致性。胎牛血清的顏色和我之前使用的批次不同,會(huì)影響血清使用效果嗎?血清的顏色取決于血紅蛋白濃度,而該參數(shù)的差異不會(huì)影響血清的性能。為什么血清的來源很重要?血清的來源(或原產(chǎn)地)是指收集未加工血液的國(guó)家。不要與血清分離、過濾或其他加工處理所在國(guó)家混淆,二者可能是不同的。血清供應(yīng)商的CoA文件應(yīng)該明確寫明血清原產(chǎn)地和加工信息。胎牛血清的免疫球蛋白含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于新生牛血清,胎牛的血清相對(duì)來說比較純。DMEM(高糖)培養(yǎng)基(含雙抗)規(guī)格
胎牛血里的生長(zhǎng)因子適合牛體內(nèi)各種細(xì)胞生長(zhǎng),通常在8個(gè)月胎齡后慢慢消失。Biochannel培養(yǎng)基價(jià)格
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采集血液獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí),應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,基本不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。Biochannel培養(yǎng)基價(jià)格
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