小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?來源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采集血液獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,基本不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份。昆山RPMI 1640 Medium (含雙抗)
胎牛血清(FBS)用作真核細(xì)胞體外細(xì)胞培養(yǎng)的生長補(bǔ)充劑。動物血清(牛血清和非牛血清)都用于細(xì)胞培養(yǎng),其中使用更普遍的是胎牛血清(FBS)。FBS含有生長因子和極低水平的抗體,因此在許多不同的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中具有多功能性。在FBS中發(fā)現(xiàn)了1000多種成分,包括蛋白質(zhì),電解質(zhì),脂質(zhì),碳水化合物,元素,酶和其他未定義的成分,這些成分在許多培養(yǎng)條件下對于支持細(xì)胞生長都是必需的。制造環(huán)境中的學(xué)術(shù)和工業(yè)研究人員以及科學(xué)家都在其細(xì)胞培養(yǎng)基中使用胎牛血清(FBS)進(jìn)行調(diào)查,包括生物技術(shù)研究/生產(chǎn),疫苗制造,克隆和動物診斷。鹽城胎牛血清解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均,減少沉淀的發(fā)生。
胎牛血清應(yīng)該怎么選?血源可追溯性:選擇來源安全、可追溯的FBS對于細(xì)胞培養(yǎng)來說至關(guān)重要。目前市面上存在較多以假亂真的FBS產(chǎn)品,科研工作者對血清的真實產(chǎn)地、來源難以鑒別。對此,國際血清行業(yè)協(xié)會(ISIA)實施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以確保FBS的質(zhì)量和安全性。例如,F(xiàn)BS供應(yīng)商是否保留原產(chǎn)地的可追溯記錄?是否持有血清生產(chǎn)各階段處理、運輸和商業(yè)交易的文件?這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素。產(chǎn)品檢測,每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產(chǎn)品分析證書(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,常規(guī)的檢測指標(biāo)包括內(nèi)有害元素、總蛋白、細(xì)菌、病毒等,例如我國藥典規(guī)定,F(xiàn)BS中內(nèi)有害元素含量應(yīng)≤10EU/mL,另外總蛋白為30-50mg/mL、血紅蛋白檢測不高于30mg/dL。
不少小伙伴對于血清的挑選、使用和儲存等方面,都有不少疑惑,我們匯總了一些常見問題,并且針對這些問題,給出了相應(yīng)的建議供大家參考。先來看看關(guān)于血清挑選的部分:如何挑選胎牛血清?1、胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)采集血液時間是5-8月齡的未出生胎牛。2、選購時詢問是否有檢測報告,并注意檢測報告中的各類指標(biāo)。3、注意血清有效期,盡量不買過期血清。4、留心觀察相關(guān)人員是否專業(yè):血清是否全程冷鏈運輸;是否嚴(yán)格儲存在-20℃冰箱中;工作人員對待血清態(tài)度如何;能否提供同一批次血清。胎牛血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均。
胎牛血清的保存方法:1、需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。3、胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。胎牛血清免受蛋白酶、毒性物質(zhì)、PH值波動、機(jī)械剪切力、氧化及自由基的損傷。連云港標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)
胎牛血清在消化過程中提供蛋白酶抑制劑,在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。昆山RPMI 1640 Medium (含雙抗)
如今已經(jīng)成為各大實驗室“??汀钡奶ヅQ?,是一種采集自新鮮的牛血液的優(yōu)良血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子,有效避免細(xì)胞貼壁受到機(jī)械的損傷。如此看來胎牛血清確實發(fā)揮出非常大的作用,那么為了讓其充分發(fā)揮更大的價值該注意哪些事項呢?注意避免沉淀加入培養(yǎng)液,添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點,除此之外,細(xì)胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細(xì)胞的正常生長。那么為了更大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進(jìn)行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。昆山RPMI 1640 Medium (含雙抗)
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