溫嶺哺乳動物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時間:2023-01-15

如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。(6)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。胎牛血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均。溫嶺哺乳動物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么?取血年齡不同:牛血清按照牛取血時間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡稱FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得來的胎牛。國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義,但通常以此稱)的指的是出生4-6小時,且未進(jìn)行哺乳(unsuckled)進(jìn)食的牛,有時還稱作國產(chǎn)新生牛。新生牛血清(NewbornCalfSerum,簡稱NBCS)指的是出生14天-3個月進(jìn)行取血的牛。成年牛血清(AdultBovineSerum,簡稱ABS)指的是取血時牛齡通常超過12個月的牛。以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒倚竽翗I(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因?yàn)榕Q酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。舟山MEM胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

胎牛血清使用中的常見問題:血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?國內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是更好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細(xì)胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。

胎牛血清給細(xì)胞提供的益處主要體現(xiàn)在6個方面:1、提供細(xì)胞生長所需的天然元素或天然的生長因子。2、提供天然的結(jié)合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和元素等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并對細(xì)胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多個鈣離子結(jié)合位點(diǎn),因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。3、天然含有粘附蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)細(xì)胞的附著、鋪展。4、提供消毒功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可清理細(xì)胞生長環(huán)境中的氧自由基(·O),具有很強(qiáng)的抗氧化活性,可防止細(xì)胞衰老。5、提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。6、提供蛋白酶抑制劑,使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。因此在細(xì)胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細(xì)胞的作用。由于胎牛血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間。

什么是優(yōu)良的胎牛血清?外觀,好的血清應(yīng)是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。pH,國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。胎牛血清提供維持細(xì)胞指數(shù)生長的激元素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物。DMEM(高糖)培養(yǎng)基(含雙抗)供應(yīng)公司

胎牛血清含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)。溫嶺哺乳動物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基

血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細(xì)胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進(jìn)離心來制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。在人類中,以下22種蛋白質(zhì)占血清和血漿總蛋白質(zhì)含量的99%:白蛋白、總IgG、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原、總IgA、α-2-巨球蛋白、總IgM、α-1-抗胰蛋白酶、C3補(bǔ)體、結(jié)合球蛋白、α-1-酸性糖蛋白、載脂蛋白-B、載脂蛋白-A1、脂蛋白(a)、因子H、銅藍(lán)蛋白、C4補(bǔ)體、補(bǔ)體因子B、前白蛋白、C9補(bǔ)體、C1q補(bǔ)體和C8補(bǔ)體。剩下的1%包括數(shù)百種蛋白質(zhì)。更豐富的血清蛋白白蛋白,濃度為50mg/ml,約占總蛋白質(zhì)量的一半。溫嶺哺乳動物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基

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