為什么有些血清是熱滅活的?如何熱滅活?哺乳動(dòng)物血清中天然存在的補(bǔ)體蛋白參與細(xì)胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細(xì)胞和血小板中釋放組胺和激發(fā)淋巴細(xì)胞和髓細(xì)胞。熱滅活破壞了血清中補(bǔ)體的活性,因此免疫學(xué)應(yīng)用,培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)推薦使用。熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘,并每隔大約10分鐘旋轉(zhuǎn)一次瓶子。為了保持精確,可使用一個(gè)類似大小的瓶子作為對(duì)照,對(duì)照瓶內(nèi)放入同等體積的水,并放置一個(gè)溫度計(jì),在溫度到達(dá)56°C時(shí)開始計(jì)時(shí)30分鐘。熱滅活過程必須小心控制,避免血清中支持細(xì)胞和組織繁殖的關(guān)鍵蛋白組分發(fā)生降解。胎牛血清可提供γ射線輻照處理的血清現(xiàn)貨,滅活病毒和其他外來微生物。麗水特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的元素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物;提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他元素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用;是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源;起酸堿度緩沖液作用;提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。徐州DMEM 培養(yǎng)基(高糖,無酚紅)胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。
胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是指在健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,由于血清采集時(shí)間早,其胎球蛋白較多,血清白蛋白含量高,而γ-球蛋白含量極低,并富含多種生長因子,因此,是培養(yǎng)細(xì)胞更為優(yōu)良的牛血清。牛血清的成分復(fù)雜,主要包含蛋白質(zhì)、多肽、元素、氨基酸、葡萄糖等多種營養(yǎng)成分。雖然其中大部分成分已為人知,但還有一部分也還不清楚,而且其組分及含量常依動(dòng)物性別、年齡、生理狀態(tài)、營養(yǎng)條件不同而有差異。血清理含有促進(jìn)細(xì)胞生長的成分外,同時(shí)含有內(nèi)有害元素、血色素、補(bǔ)體、抗體等其他有害成分,影響細(xì)胞生長甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,因此,通常需要測試工作才知道對(duì)細(xì)胞生長的效果。低質(zhì)量的血清常被病毒、菌體和支原體等微生物傳染,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗,浪費(fèi)了科研人員的時(shí)間和精力。
胎牛血清與新生牛血清的區(qū)別:組份與比例不同,雖然胎牛血清與新生牛血清的成分并不存在很大的差別,可是諸如促細(xì)胞生長因子和促貼附因子等組份并不相同,而且兩者之間的元素以及其他活性物質(zhì)的比例也不同。胎牛血里的生長因子適合牛體內(nèi)各種細(xì)胞生長,通常在8個(gè)月胎齡后慢慢消失。另外,胎牛血清的免疫球蛋白含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于新生牛血清,胎牛的血清相對(duì)來說比較純,所以培養(yǎng)細(xì)胞的效果會(huì)更佳。用途與用法不同,由于胎牛血清與新生牛血清存在細(xì)微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
血清解凍后為何會(huì)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之。去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g,1-2分鐘稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。杭州RPMI 1640 Medium
無合格質(zhì)檢的胎牛血清存在支原體、病毒等污染,這對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)造成嚴(yán)重不良影響。麗水特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么?取血年齡不同:牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡稱FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得來的胎牛。國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義,但通常以此稱)的指的是出生4-6小時(shí),且未進(jìn)行哺乳(unsuckled)進(jìn)食的牛,有時(shí)還稱作國產(chǎn)新生牛。新生牛血清(NewbornCalfSerum,簡稱NBCS)指的是出生14天-3個(gè)月進(jìn)行取血的牛。成年牛血清(AdultBovineSerum,簡稱ABS)指的是取血時(shí)牛齡通常超過12個(gè)月的牛。以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒倚竽翗I(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因?yàn)榕Q酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。麗水特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
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