CCK-8試劑盒是CellCountingKit的簡稱，是一種應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其基本原理是：該試劑中含有WST-8（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(Formazan)，反應機制如下圖所示。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。即生成甲臜顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。隨著科技的發(fā)展，誕生了不同作用性的抑制劑。湖州Acetylcysteine (乙酰半胱氨酸）
基于BTP衍生的STAT3抑制劑：SH2結(jié)構(gòu)域是許多非肽類STAT3抑制劑分子的結(jié)合位點，SH2結(jié)構(gòu)域蛋白表面具有三個溶劑可接近的亞口袋：磷酸化Tyr705(p-Tyr705)結(jié)合口袋(pY口袋，殘基591、609-620)、Leu706亞位點(pY+1口袋，殘基626-639)、疏水側(cè)口袋(pY-X口袋，殘基592-605)。其中pY亞口袋較寬，由極性殘基Lys591、Ser611、Glu612、Ser613、Arg609組成，在STAT3與其他STAT成員的同源或雜源二聚化過程中，能與p-Tyr705形成氫鍵和鹽橋；pY+1和pY-X主要為非極性和疏水，由Thr620、Trp623、Lys626、Gln635、Val637、Ile659組成的pY+1口袋是動態(tài)的，且難以靶向；由Glu594、Arg595、Ile597、Ile634組成的pY-X口袋是STAT3獨有的，有助于設計選擇性STAT3抑制劑。大多數(shù)STAT3抑制劑通常不止占據(jù)一個亞口袋，但三個口袋對于親和力并不等同，pY口袋親和力高，因此許多STAT3抑制劑目的在于設計靶向pY口袋。Tunicamycin (衣霉素)哪里有賣RSL3 ((1S,3R)-RSL3) 可降低 GPX4 的表達，誘導頭頸部細胞的肥大性死亡。
CCK-8的用途是什么？杭州昊鑫生物科技股份有限公司小編介紹，CCK-8的用途：1、細胞增殖測定：CCK-8細胞增殖實驗，很多領(lǐng)域都會用到，比如瘤相關(guān)、損傷后修復等。2、藥物篩選：在測定一個藥物的毒性和安全有效濃度時，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。4、瘤藥敏試驗：這個是用的比較廣的，團隊買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。5、微生物對細胞的毒性或增殖的實驗。
CCK-8試劑盒細胞增殖試驗：1.接種細胞懸液100μl(2000個/孔)于96孔板，預先置于37℃，5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。2.加入10μLCCK-8，由于每孔加入CCK-8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻，同時要注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)。3.把培養(yǎng)板放培養(yǎng)箱內(nèi)1-4小時。由于細胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。4.測定450nm吸光度，建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm，參比波長600-650nm。抑制劑是市場需求下產(chǎn)生的一種治病產(chǎn)品。
STAT2是I型干擾素(IFN-α/β)信號傳導通路的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在介導抗病毒免疫和抗增殖信號中發(fā)揮重要作用。STAT4和STAT6可分別受到IL-12和IL-4的喚醒，是免疫應答調(diào)控的中心調(diào)節(jié)因子。除了調(diào)節(jié)免疫應答作用外，STAT1也能抑制瘤細胞增殖，并促進瘤細胞凋亡。與STAT1相反，STAT3和STAT5蛋白都是JAK-STAT信號通路的下游致病介導因子，而該通路能夠促進細胞增殖和存活。STAT3控制著細胞周期進程和抗細胞凋亡，因此，常與多種人類病癥的發(fā)展和不良預后有關(guān)。除了參與病癥進程，STAT3也參與類風濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病和炎癥性腸病等自身免疫和炎癥疾病進展。因此，STAT3已成為具有吸引力的免疫以及炎癥疾病治理靶點，開發(fā)抑制劑作為STAT3相關(guān)的疾病治理成為重要的藥物研究方向。CCCP 是氧化磷酸化 (OXPHOS) 解偶聯(lián)劑。湖州Acetylcysteine (乙酰半胱氨酸）
在提取物中添加適當?shù)牡鞍酌?、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法。湖州Acetylcysteine (乙酰半胱氨酸）
CCK-8試劑盒操作說明：細胞活性檢測。1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)一段時間（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4h。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24h內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。湖州Acetylcysteine (乙酰半胱氨酸）
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