支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞，也可以是培養(yǎng)基。在細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體污染是常見(jiàn)的問(wèn)題，因此需要對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞庫(kù)、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查，這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。同時(shí)，病毒類(lèi)疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體，必要時(shí)，也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外，支原體檢測(cè)的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等，這些培養(yǎng)基可用于檢測(cè)藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此，支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞，也可以是培養(yǎng)基，具體取決于檢測(cè)的目的和方法。
細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染怎么去除？溫州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)方法bst
支原體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景非常廣*，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)：在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此，支原體檢測(cè)在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要?？蒲兄谐Ｓ玫葴?cái)U(kuò)增的方法簡(jiǎn)單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn)：在生物制品的生產(chǎn)過(guò)程中，如疫苗、生物藥物等，需要確保產(chǎn)品無(wú)支原體污染，以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測(cè)。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。
蘇州支原體檢測(cè)方法細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性？
細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體檢測(cè)的重要性體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
1. 高污染發(fā)生率：支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高，據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。
3. 隱匿性強(qiáng)：支原體污染具有很高的隱匿性，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非使用特異性和靈敏度都非常高的專(zhuān)業(yè)檢測(cè)試劑盒。
3. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果：支原體污染會(huì)改變細(xì)胞的生理性質(zhì)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染，會(huì)改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達(dá)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。
4. 難以通過(guò)肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)：支原體污染無(wú)法通過(guò)肉眼檢查細(xì)胞來(lái)發(fā)現(xiàn)，也不能通過(guò)向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。
5. 對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響：支原體污染會(huì)降低細(xì)胞系的有效性，使得細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性，無(wú)法為生命科學(xué)研究提供有意義的數(shù)據(jù)。
6. 預(yù)防和控制污染的必要性：定期進(jìn)行支原體檢測(cè)是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行自我質(zhì)量監(jiān)控的必要組成部分，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)并控制污染，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
7. 避免細(xì)胞株受損：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞株受損，影響細(xì)胞株的質(zhì)量和研究?jī)r(jià)值。及時(shí)檢測(cè)和清*支原體污染有助于保護(hù)珍貴的細(xì)胞資源
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種，以下是一些常用的檢測(cè)手段：
1. 顯微鏡檢測(cè)：通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞，支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周?chē)蚋接诩?xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn)。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡(jiǎn)便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增，是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法：基于LAMP技術(shù)，室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染。
支原體的檢測(cè)方法有哪些？
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方法
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靈敏度
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優(yōu)勢(shì)
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劣勢(shì)
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標(biāo)準(zhǔn)
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ü 費(fèi)勞力
ü 耗時(shí)長(zhǎng)
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類(lèi)需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽(yáng)性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測(cè)
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ü 費(fèi)時(shí)
ü 需要細(xì)胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價(jià)格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測(cè)支原體種屬
ü 價(jià)格略高
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ü 可檢測(cè)的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
ü 費(fèi)勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴(lài)引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴(lài)引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無(wú)需DNA提取
ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴(lài)引物特異性
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的后果？北京支原體去除試劑價(jià)格
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支原體檢測(cè)假陽(yáng)性的原因？溫州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)方法bst
支原體去除試劑使用后，對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過(guò)特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來(lái)殺死支原體，而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過(guò)程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽(yáng)性結(jié)果。因此，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè)，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
溫州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)方法bst