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蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質(zhì)/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準確地特異性分析。蛋白質(zhì)組的研究能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ)。哈爾濱定量蛋白組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組學在生物學領(lǐng)域的研究中的應用是怎樣的?研究對象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達蛋白,理論上都可以應用蛋白質(zhì)組學。蛋白質(zhì)組學是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應用科學。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細來說,蛋白質(zhì)組學包含許多分支:非標定量蛋白質(zhì)組學(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(對生物體蛋白表達含量進行測定),修飾蛋白質(zhì)組學(對蛋白質(zhì)翻譯后修飾進行檢測)及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機制解析)等。蛋白質(zhì)組學屬于后基因組時代的科學研究,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。因此更能反應出生物體生理條件下的水平與狀態(tài)。貴陽蛋白質(zhì)組學分析方法蛋白質(zhì)組的概念指由一個基因組,或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(zhì)。
我國科學家已經(jīng)在重大疾病如肝病、維甲酸誘導白血病細胞凋亡啟動模型及維甲酸定向誘導胚胎干細胞向神經(jīng)系統(tǒng)分化的模型等比較蛋白質(zhì)組研究以及一些重要生理和病理體系的蛋白質(zhì)組成分研究方面獲得了重要成就。蛋白質(zhì)組學的重要應用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應用、在微生物蛋白質(zhì)組學中的應用、在植物研究中的應用、在腎臟病學領(lǐng)域的應用。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、診療、預后評估信息;可以早期更為準確的診斷出胰腺?。灰部梢詾锳D的診斷、診療藥物的設(shè)計和篩選奠定基礎(chǔ)。這項研究技術(shù)其實離我們生活非常近,對我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學的發(fā)展。
蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學,包括對蛋白質(zhì)表達模式和蛋白質(zhì)組功能模式的研究。蛋白質(zhì)組學的發(fā)展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學研究等有重要意義,也因此被普遍應用于醫(yī)學研究。蛋白質(zhì)組學研究,總體可分為一下幾個步驟:(1)差異篩選(Discovery)(2)初步驗證(Verification)(3)然后確診(Validation)?;谫|(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學。蛋白質(zhì)組學在應用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計和建立針對這些目標蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。貴陽TMT/iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)
蛋白質(zhì)組學技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。哈爾濱定量蛋白組學質(zhì)譜分析
蛋白質(zhì)組學發(fā)展趨勢:1、基礎(chǔ)研究方面:近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應用到各種生命科學領(lǐng)域,如細胞生物學、神經(jīng)生物學等。在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。在未來的發(fā)展中,蛋白質(zhì)組學的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?、應用研究方面:蛋白質(zhì)組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景,目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進行蛋白質(zhì)組學方面的應用性研究。哈爾濱定量蛋白組學質(zhì)譜分析
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