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代謝組學(xué)如何控制臨床樣本的質(zhì)量?對于臨床的樣本建議每組比較低的25個生物學(xué)重復(fù),達(dá)到30例以上比較好。因為臨床樣本受外界環(huán)境和遺傳背景影響較大,需要很多生物學(xué)重復(fù)來消除這些外在影響。此外,在樣本收集過程中,應(yīng)保持收養(yǎng)的時間段和操作程序盡可能一致。代謝組學(xué)樣本收集取樣基本原則:表示性和一致性:驗組與對照組樣本在取材部位、時間處理等方面盡可能保持一致,從而保證實驗的可信度;迅速性:操作過程迅速,很大限度縮短樣本采集到實驗的時間;低溫原則:所有樣本離體后,分離步驟應(yīng)在4℃或冰上進行,分離好的樣本立即存于-80℃,以免樣本產(chǎn)生進一步代謝活動。在食品安全領(lǐng)域,利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個熱點領(lǐng)域。北京脂質(zhì)代謝組學(xué)多分析價格
代謝組學(xué)研究方法: 對于代謝產(chǎn)物來說,不只只有質(zhì)譜峰這個特征。更進一步說,質(zhì)譜(MS)并不能檢測出所有的代謝產(chǎn)物,并不是因為質(zhì)譜的靈敏度不夠,而是由于質(zhì)譜只能檢測離子化的物質(zhì),但有些代謝產(chǎn)物在質(zhì)譜儀中不能被離子化。采用核磁共振(NMR)的方法,可以彌補色譜的不足。過去,只有毒理學(xué)方面的研究使用核磁共振,而質(zhì)譜只在植物代謝研究中采用。如今,這兩種方法在代謝組學(xué)研究中已經(jīng)普遍使用。為在不同樣品間進行有意義的比較,研究人員必須結(jié)合使用這兩種方法獲得的大量數(shù)據(jù)進行分析。此外,還需要結(jié)合基因組學(xué)研究獲得的數(shù)據(jù)。山東脂質(zhì)代謝組學(xué)多分析方法較低的費用,是促使代謝組學(xué)在臨床上易于接受的另一個原因。
代謝組學(xué)尿液樣本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(臨床)或晨間1 h尿(動物)于50 mL離心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm離心10 min取上清,用1.5 mL離心管分裝,保存于-80 ℃。3)動物1 h尿量不夠的情況下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用帶低溫裝置的代謝籠收集,并且及時凍存樣本。4)收集完尿液樣本后,建議使用液氮淬滅15 min后,再分裝多管后于-80 ℃凍存。組織樣本收集:動物組織(包括腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮膚等;軟體動物如血吸蟲):1)取適量組織,用預(yù)冷的PBS緩沖液或生理鹽水清洗干凈;2)迅速剝?nèi)シ潜匦璧闹竞徒Y(jié)締組織,再用PBS緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,將組織分成50-100 mg / 管分裝待用;4)管子上做好標(biāo)記后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存;干冰運輸。
代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?根據(jù)不同的檢測要求,需要配合不同的樣本量和樣本采集方法,常規(guī)的方法和單個樣本量如下:(1) 微生物和細(xì)胞樣本:細(xì)胞迅速猝滅細(xì)胞并冷凍保存;單個樣本細(xì)胞數(shù)量要求10^6。(2) 動物體液(如尿、血、組織、唾液):采樣后要迅速預(yù)處理,如加入抗凝血劑、防腐劑,并立即冷凍處理(-80 ℃);單個樣本要求體積為10μL。(3) 植物樣本:采集后迅速冷凍(液氮),然后轉(zhuǎn)入-80℃保存,單個樣本要求質(zhì)量為50mg。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來的一門學(xué)科。
代謝組學(xué)究竟是一門什么樣的研究方向?首先定義什么是代謝組學(xué)。簡單的說就是研究生物體對內(nèi)外刺激的整體代謝應(yīng)答規(guī)律。那么為什么代謝組學(xué)是基因組,轉(zhuǎn)錄組,蛋白質(zhì)組的下游。我們研究它到底有什么意義。中心法則告訴我們了遺傳信息的流向,的執(zhí)行者蛋白質(zhì)中很多酶參與了體內(nèi)的代謝過程?;驕y序數(shù)量太大,而且基因水平解釋問題往往很吃力。因為基因的調(diào)控和生物學(xué)事件之間隔了一個很漫長的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。蛋白同理,一是蛋白種類巨大,二是蛋白組學(xué)發(fā)展進入瓶頸;發(fā)展代謝組是因為代謝物種類只有不到1w種,建立它的差異分析更加簡單,同時在價格等方面更有推廣的意義。代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(分子量<1000)。山東脂質(zhì)代謝組學(xué)多分析方法
代謝組學(xué)技術(shù)可應(yīng)用于疾病早期診斷。北京脂質(zhì)代謝組學(xué)多分析價格
代謝組學(xué)樣本收集植物組織:葉片、莖、花:1)取整片葉片/一段莖/一朵花,放入離心管或錫箔紙中并標(biāo)記,迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。2)將裝有樣本的離心管迅速放入自封袋中(每組一袋),在自封袋中放入標(biāo)簽紙注明樣本信息。3)迅速放入-80 ℃冰箱凍存。足量干冰寄送。注意:(1)采集葉片樣本時,在中午光照好的時間收集。(2)采集樣本時保持樣本一致性,尤其是同一組樣本(顏色、衰老程度、葉脈占比、光照、位置等)。根:1)取整株植物的根部,迅速用PBS緩沖液或者超純水漂洗掉根上的泥土、培養(yǎng)基或營養(yǎng)液等;2)吸水紙吸干水分后,分裝為500 mg/管;3)標(biāo)號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。北京脂質(zhì)代謝組學(xué)多分析價格
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