河南常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-05

蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)??茖W(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(SystemBiology)研究模式,將成為未來(lái)生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。河南常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):飛行時(shí)間質(zhì)譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質(zhì)分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當(dāng)用激光(337nm的氮激光)照射晶體時(shí),基質(zhì)分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使樣品分子電離。它從固相標(biāo)本中產(chǎn)生離子,并在飛行管中測(cè)定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質(zhì)量指紋圖譜,非常快速(每次分析只需3~5min),靈敏(達(dá)到fmol水平),可以精確測(cè)量肽段質(zhì)量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。貴州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)多少錢(qián)蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?目前高通量檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進(jìn)入質(zhì)譜,對(duì)每個(gè)被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進(jìn)行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對(duì)應(yīng)的色譜峰面積或者報(bào)告離子強(qiáng)度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做?當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級(jí)質(zhì)譜信號(hào)比較強(qiáng)的Top20的多肽進(jìn)行二級(jí)打碎,然后進(jìn)入二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。其優(yōu)勢(shì)是二級(jí)譜圖采集的肽段信息都來(lái)源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。

蛋白組學(xué)研究怎么做?PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺(tái),首先利用四級(jí)桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對(duì)母離子進(jìn)行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對(duì)復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”。

PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類(lèi):a.相對(duì)定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技術(shù)優(yōu)勢(shì):(1)無(wú)需抗體,可直接對(duì)樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。(2)高特異性、準(zhǔn)確度和靈敏度,靶向檢測(cè)目標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)的多個(gè)unique肽段。(3)通量高,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)幾十個(gè)蛋白的定量檢測(cè)。樣本要求:動(dòng)物及臨床組織標(biāo)本100mg/sample,血清、血漿200μL/sample,細(xì)胞、微生物1×107cells/sample。應(yīng)用方向:驗(yàn)證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果;目標(biāo)蛋白相對(duì)定量和一定定量分析。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,針對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)與定量。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)并帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。杭州4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存。河南常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。河南常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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