杭州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類(lèi)型：根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同，可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類(lèi)，即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、?；姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)羥氨基酸（如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)精氨酸、賴(lài)氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 ?；姿猁}蛋白質(zhì)通過(guò)天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。乙?；揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。杭州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過(guò)程的重要方式，幾乎在每個(gè)細(xì)胞過(guò)程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。因此，要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白，純化方法是必要的，以分離修飾蛋白和肽段，然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行，可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。浙江蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)領(lǐng)域蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略：早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期，或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而，許多生命過(guò)程不只受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制，還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此，揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。目前，發(fā)現(xiàn)的比較常見(jiàn)的修飾類(lèi)型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)?；诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn)，主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類(lèi)似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法，包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

蛋白質(zhì)乙酰化修飾鑒定流程：1. 組織/細(xì)胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?；贵w對(duì)乙酰化修飾肽段進(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析，并對(duì)鑒定的乙?；稽c(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè)。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展，我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到，對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程，密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài)，更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí)，借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系。蛋白質(zhì)乙?；揎棧櫭剂x指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?；鶊F(tuán)。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾：蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過(guò)可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合，調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用，翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。通過(guò)實(shí)驗(yàn)的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點(diǎn)需要耗費(fèi)大量的資金和時(shí)間，并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實(shí)現(xiàn)。而計(jì)算的方法則能夠快速、準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。浙江蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)領(lǐng)域

常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。杭州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

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