蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測(cè)方法：質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一，可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs），如磷酸化、乙?；?、泛素化、SUMO化、糖基化等，大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性。檢測(cè)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾，了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟，因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測(cè)方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的，以比較好的識(shí)別、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略：常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有：a. 凝集素親和技術(shù)；b. 肼化學(xué)富集；c. 親水性相互作用色譜法；d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?；谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測(cè)定方法有：a. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一種由76個(gè)氨基酸組成的多肽，在真核生物中高度保守，可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價(jià)連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記，泛素用親和標(biāo)簽（通常為6xHis）進(jìn)行標(biāo)記，并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu)，經(jīng)胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上，使肽的質(zhì)量增加114，因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)分離，使用針對(duì)特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。武漢棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)價(jià)格乙酰化修飾是體內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。
翻譯后修飾蛋白的檢測(cè)方法：翻譯后修飾蛋白的檢測(cè)技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中，免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測(cè)中的關(guān)鍵步驟，它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標(biāo)蛋白，之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標(biāo)蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測(cè)，其中Western blot相對(duì)簡(jiǎn)單但依賴于特異性抗體且無法識(shí)別單個(gè)蛋白質(zhì)變化，質(zhì)譜則可以檢測(cè)包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識(shí)來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體，以及有沒有目標(biāo)等選擇合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾類型：根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同，可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類，即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、?；姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過羥氨基酸（如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 ?；姿猁}蛋白質(zhì)通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。目前對(duì)乙酰化修飾的功能研究主要集中在對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控，以及對(duì)代謝通路的調(diào)控這兩個(gè)方面。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略：早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期，或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而，許多生命過程不只受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制，還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此，揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過程。目前，發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)。基于翻譯后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn)，主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法，包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。在眾多乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)中，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。濟(jì)南蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)有哪些
蛋白質(zhì)磷酸化修飾怎么定義？蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)：泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。樣品要求：1、SDS-PAGE條帶：5個(gè)以上可見考染條帶。2、溶液（目標(biāo)蛋白質(zhì)）：目標(biāo)蛋白總量>50μg，目標(biāo)蛋白濃度>80%。3、溶液（大規(guī)?；旌系鞍踪|(zhì)）：蛋白總量>1mg，蛋白濃度>1μg/μl。蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)分析研究
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