北京Label free非標記定量蛋白質組學方法

來源: 發(fā)布時間:2022-05-21

蛋白質組學研究應用:近年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等。生物信息學的發(fā)展已給蛋白質組研究提供了更方便、有效的計算機分析軟件,隨著基因組學的迅速推進,會給蛋白質組研究提供更多更全的數(shù)據(jù)庫。另外,蛋白質組學與其它學科的交叉也將推動新技術、新方法的發(fā)展。特別是蛋白質組學與其它大規(guī)模科學如基因組學,生物信息學領域的交叉,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學研究模式,將成為未來的生命科學新前沿。蛋白質組學技術的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術快速發(fā)展的重要支撐。北京Label free非標記定量蛋白質組學方法

蛋白質組學研究內容:1.蛋白質鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結合相關技術,利用蛋白質芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質調節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質的功能具有重要作用。3.蛋白質功能確定:如分析酶活性和確定酶底物,細胞因子的生物分析/配基-受體結合分析。可以利用基因敲除和反義技術分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質的功能。另外對蛋白質表達出來后在細胞內的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質功能的了解。有的熒光蛋白表達系統(tǒng)就是研究蛋白質在細胞內定位的一個很好的工具。山東外泌體蛋白質組學領域近年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域。

蛋白質組學的重要應用領域有:在臨床疾病中的應用、在微生物蛋白質組學中的應用、在植物研究中的應用、在腎臟病學領域的應用。我們通過研究蛋白質組,可以為患者提供有用的疾病診斷、預后評估信息;可以早期更為準確的診斷出胰腺?。灰部梢詾锳D的診斷、治理藥物的設計和篩選奠定基礎。這項研究技術其實離我們生活非常近,對我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質分離與鑒定技術,如雙向電泳、生物質譜、蛋白質芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質組學的發(fā)展。

蛋白質組學研究策略:蛋白質組學研究主要分為自底向上(Bottom-Up),自頂向下(Top-Down)和自中向下(Middle-Down)三種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質酶解生成的肽段來鑒定蛋白質。當應用該策略來分析蛋白質組混合物時,因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質組學(Shotgun Proteomics),該策略依賴于蛋白酶的酶切。“自中向下”策略也依賴于蛋白酶的酶切,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。蛋白質組研究技術涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等。

PRM靶向定量蛋白質組學實驗原理:PRM技術是一種根據(jù)已知實測信息或質譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為Q Exactive系列質譜儀,首先以四極桿作為質量過濾器,特異性地選擇與預先設定質荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景。江蘇定量乙?;鞍踪|組學報價

蛋白質組研究為疾病的診斷、疫苗及新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。北京Label free非標記定量蛋白質組學方法

蛋白質組學植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實驗能夠提取到充足的蛋白。如果是種仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時需要添加干冰。北京Label free非標記定量蛋白質組學方法