廣東靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-26

轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq):轉(zhuǎn)錄組即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)主要通過(guò)高通量測(cè)序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA的表達(dá)量,進(jìn)而對(duì)相關(guān)基因和表型的關(guān)系進(jìn)行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實(shí)現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達(dá)分析的主要技術(shù)是基因芯片,不過(guò)由于高通量測(cè)序成本的下降,RNA-seq的運(yùn)用愈來(lái)愈普遍。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序樣品純度要求,電泳檢測(cè)28S:18S至少大于1.8。廣東靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)試步驟:第1步就是把單個(gè)細(xì)胞分選出來(lái)。分選的方式也比較多,物理切割,酶消化,F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個(gè)單細(xì)胞,跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來(lái)去建庫(kù)測(cè)序。但是一個(gè)細(xì)胞里的RNA含量是比較少的,難建庫(kù)成功。這個(gè)里面“量”的概念很有意思。比如說(shuō)單細(xì)胞量少,需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少,所以說(shuō)整個(gè)富集的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一部分基因在一個(gè)細(xì)胞里能檢測(cè)到,在另外一個(gè)細(xì)胞里面檢測(cè)不到,而每個(gè)細(xì)胞里面的檢測(cè)存在一個(gè)隨機(jī)性,同時(shí)單細(xì)胞測(cè)序深度比較低,所以說(shuō)分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意,但整體的分析思路是類(lèi)似的。杭州單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)檢測(cè)價(jià)格轉(zhuǎn)錄組學(xué)是功能基因組學(xué)研究的重要組成部分。

circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué):是一類(lèi)具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒(méi)有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細(xì)胞質(zhì)或儲(chǔ)存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達(dá)更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時(shí)由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)的催化關(guān)鍵,然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來(lái)源,circRNA可大致分為四類(lèi):全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序流程:1、樣品RNA準(zhǔn)備。2、測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建。3、DNA成簇(Cluster)擴(kuò)增。4、高通量測(cè)序(Illumina)。5、數(shù)據(jù)分析。轉(zhuǎn)錄組的分析大致有以下幾種情況:1、同一物種在發(fā)育過(guò)程中的各時(shí)間節(jié)點(diǎn)的基因表達(dá)特點(diǎn)及存在的差異;2、不同品系之間存在的差異表達(dá)基因;3、不同的外界條件處理,如細(xì)菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫,對(duì)基因表達(dá)的影響;4、同一個(gè)體,不同組織之間的基因表達(dá)差異。簡(jiǎn)而言之,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標(biāo)基因?

RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用:RNA-Seq即對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序和分析。一般來(lái)說(shuō)在研究所會(huì)委托公司測(cè)序得到數(shù)據(jù)自己進(jìn)行后續(xù)的生信分析(質(zhì)控,mapping,差異基因表達(dá)分析,SNV分析等)。RNA-Seq有著巨大的應(yīng)用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種,不同組織:研究基因在不同部分的表達(dá)情況。同一物種,同一組織:研究基因在不同處理下,不同條件下的表達(dá)變化。同一組織,不同物種:研究基因的進(jìn)化關(guān)系。時(shí)間序列實(shí)驗(yàn):基因在不同時(shí)期的表達(dá)情況與發(fā)育的關(guān)系。基因分類(lèi):找到細(xì)胞特異,疾病相關(guān),處理相關(guān)的基因表達(dá)模式,用于診斷疾病和預(yù)測(cè)等。基因網(wǎng)絡(luò)和通路:基因在細(xì)胞活動(dòng)中的功能,基因間的相互作用。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序可以同時(shí)測(cè)到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?北京外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析方法

轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切和融合基因。廣東靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域

轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics)是功能基因組學(xué)(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門(mén)在整體水平上研究細(xì)胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學(xué)家也逐漸認(rèn)識(shí)到對(duì)基因結(jié)構(gòu)序列的研究只是基因組學(xué)研究的一部分,并不能揭示所有的生命奧秘,所以接下來(lái)需要解決的問(wèn)題是:研究這些基因序列的功能、參與的生命過(guò)程、表達(dá)調(diào)控方式,以及這些基因在不同的時(shí)空條件下的表達(dá)差異等。這些問(wèn)題都需要功能基因組學(xué)技術(shù)來(lái)解決,而轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)是功能基因組學(xué)研究的重要組成部分。對(duì)基因及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物功能研究的功能基因組學(xué),將為疾病控制和新藥開(kāi)發(fā)、作物和畜禽品種的改良提供新思路,為人類(lèi)解決健康問(wèn)題、食物問(wèn)題、能源問(wèn)題和環(huán)境問(wèn)題提供新方法。廣東靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域