武漢蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)有哪些

來源: 發(fā)布時間:2022-04-26

蛋白翻譯后修飾位點鑒定:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程,并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能,對于蛋白質(zhì)修飾位點的發(fā)現(xiàn)及研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點:時間快,周期短;識別位點準確,采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類型。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。武漢蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)有哪些

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):是植物體內(nèi)比較常見的PTM修飾手段。它是指通過蛋白激酶和磷酸酶的作用在特定絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基上添加或去除一個或多個磷酸基團,進而有效地改變底物蛋白的結(jié)構(gòu)和活性。在植物體內(nèi)主要參與植物溫度脅迫、鹽脅迫、干旱脅迫、養(yǎng)分脅迫調(diào)控等大多數(shù)代謝和生理途徑。蛋白質(zhì)磷酸化對于許多生物現(xiàn)象的引發(fā)是很必要的,包括細胞生長、增殖、泛素(ubiquitin)介導(dǎo)的蛋白降解等過程。特別是酪氨酸磷酸化,作為細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和酶活性調(diào)控的一種主要方式,通常通過引發(fā)蛋白質(zhì)之間的相互作用,進而介導(dǎo)生長因子和細胞因子等對細胞膜上受體的信號調(diào)控。江蘇泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關(guān)鍵作用。

乙?;揎椀鞍捉M學(xué)實驗流程:1)組織/細胞破碎,提取蛋白質(zhì);2)蛋白酶解成多肽片段;3)對多肽片段進行 iTRAQ 標記;4)高效特異性乙?;贵w富集乙?;揎楇亩?;5)使用 LC-MS/MS 對富集的乙?;亩芜M行序列分析;5)數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,并對產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進行解釋。乙?;且粋€普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,不僅集中在對細胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面,而且還影響參與細胞周期和新陳代謝、肌動蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙酰化不僅存在于真核細胞中,而且越來越多的證據(jù)也表明乙?;瑯佑绊懺S多原核細胞的生理生化過程。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是什么?蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程,即通過1個或幾個氨基酸殘基加上修飾基團或通過蛋白質(zhì)水解剪去基團而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)。蛋白質(zhì)氨基酸序列的特定位置可以與化學(xué)基團或者小分子量的蛋白共價結(jié)合從而發(fā)生蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),相較于沒有發(fā)生修飾的蛋白,PTMs會導(dǎo)致特定序列分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析;通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。

定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導(dǎo)、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學(xué)問題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。技術(shù)原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對樣品的定量分析。乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?,將乙酰CoA的乙?;鶊F轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上。廣州氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)普遍存在于真核細胞內(nèi),故名泛素。武漢蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)有哪些

磷酸化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用:蛋白質(zhì)組(Proteome)泛指一個生命體內(nèi)所有蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué),是對蛋白質(zhì)進行定性、定量及功能的分析。定性分析包括鑒定蛋白質(zhì)的序列、PTM及蛋白之間的相互作用,對比來看,磷酸化蛋白質(zhì)組(Phosphoproteome)就是蛋白質(zhì)組中全部的磷酸化蛋白質(zhì),而磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)(Phosphoproteomics,下文簡稱PP)就是針對磷酸化蛋白質(zhì)的全方面的分析,包括對磷酸化的鑒定、定位和定量。本來屬于蛋白質(zhì)組學(xué)的一個分支,但隨著研究的深入,人們在各個領(lǐng)域關(guān)于PP都有重大發(fā)現(xiàn),基于PP的研究也越來越多。武漢蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)有哪些