南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

來源: 發(fā)布時間:2022-04-25

泛素化修飾蛋白組學研究:泛素化修飾蛋白組學是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對修飾進行富集以提高其豐度,然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對富集得到的泛素化肽段樣品進行定量分析。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學對于蛋白質(zhì)修飾位點的發(fā)現(xiàn)及研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

乙酰化修飾蛋白組學實驗流程:1)組織/細胞破碎,提取蛋白質(zhì);2)蛋白酶解成多肽片段;3)對多肽片段進行 iTRAQ 標記;4)高效特異性乙?;贵w富集乙酰化修飾肽段;5)使用 LC-MS/MS 對富集的乙?;亩芜M行序列分析;5)數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。乙酰化是一個普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,不僅集中在對細胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面,而且還影響參與細胞周期和新陳代謝、肌動蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙?;粌H存在于真核細胞中,而且越來越多的證據(jù)也表明乙酰化同樣影響許多原核細胞的生理生化過程。深圳蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學分析研究蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎上面嫁接上乙?;鶊F。

泛素化修飾PRM定量驗證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動。首先對泛素化的蛋白進行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點上會產(chǎn)生兩個甘氨酸的殘基(K-GG),利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復雜樣本中的泛素化肽段,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,實現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。

乙?;揎椀鞍捉M學應用方向:1、乙?;揎椗c細胞基因表達調(diào)控、表觀調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙?;鸬拇x疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機理研究。乙?;飳W意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細胞定位。生物領域各個研究方面,如:1、農(nóng)林領域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,育種保護研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機理研究等。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì),進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有有效性。廣州蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學一般流程

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾介紹:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,乙酸酯,酰胺基或甲基等官能團增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細胞生物學和發(fā)病機理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用,如細胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導和調(diào)節(jié)過程、基因表達調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細胞生物學以及疾病診斷和預防研究中至關重要。南京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學分析研究