廣東PRM定量蛋白質組學研究方法

非標定量法(Label-free)是通過比較質譜分析次數(shù)或質譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關，因此蛋白質被質譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質的豐度，通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質譜檢測計數(shù)與蛋白質的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質進行定量。按照其原理主要分為兩種，第1種spectrumcounts類的非標記方法，發(fā)展比較早，已經(jīng)形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結果為定量基礎，各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。Label Free 非標記定量蛋白質組學技術處理步驟簡單，成本低。廣東PRM定量蛋白質組學研究方法

蛋白質組學的分析介紹：蛋白質組學的分析主要指蛋白的生信分析，依賴于數(shù)據(jù)庫的建立。現(xiàn)在常用的蛋白質組學生信分析有GO功能分析和KEGG通路分析。GO（gene ontology）是基因本體聯(lián)合會（Gene Onotology Consortium）所建立的數(shù)據(jù)庫。根據(jù)基因產(chǎn)物的相關分子功能、生物學途徑、細胞組分而給予定義，無物種相關性。是系統(tǒng)分析基因功能，它將基因組的信息與基因功能聯(lián)系起來，旨在揭示生命現(xiàn)象的遺傳與化學藍圖。旨在借助計算機全方面地展示細胞和生物所包含的生物學信息；根據(jù)基因組中的信息，用計算機計算或者預測出比較復雜的細胞中的通路或者生物的復雜行為。武漢定量乙酰化蛋白質組學應用在當前的生物醫(yī)學研究和臨床診斷中，蛋白質組學相關技術有非常多的應用。

蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用：蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。labelfree-非標定量法分析技術方法：非標定量法[Labelfree]是近年來重要的質譜定量方法，通過比較質譜分析次數(shù)或質譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化。蛋白質非標記定量技術（LabelFree）是通過液質聯(lián)用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內部標準，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質時所產(chǎn)生的質譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應肽段的信號強度，從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。

蛋白質組學技術方法介紹：蛋白質組學技術方法：生物質譜：生物質譜技術是蛋白質組學研究中比較重要的鑒定技術，其基本原理是樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子之間的荷質比（M/E）的差異來分離并確定分子量。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標蛋白質用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵）成肽段，對這些肽段用質譜進行鑒定與分析。目前常用的質譜包括兩種：基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）和電噴霧質譜（ESI- MS）。蛋白質組學研究策略有什么？

PRM靶向蛋白質組學：是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術，首先利用四級桿質量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子，隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂，然后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣能夠對目標蛋白質、目標肽段（如發(fā)生翻譯后修飾的肽段）進行選擇性檢測，即可對目標蛋白質/肽段進行相對(一定)定量。隨著質譜、系統(tǒng)生物學、生物信息學等相關學科的發(fā)展，我認為今后我們會更多地在現(xiàn)實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變（鐮刀形紅細胞癥）、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計，應該遠小于1%的ELISA測試量。蛋白質組學技術有生物質譜。深圳新型修飾蛋白組學質譜分析

蛋白質組學技術的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術快速發(fā)展的重要支撐。廣東PRM定量蛋白質組學研究方法

蛋白質組學技術：飛行時間質譜：MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶體，當用激光（337nm的氮激光）照射晶體時，基質分子吸收激光能量，樣品解吸附，基質-樣品之間發(fā)生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產(chǎn)生離子，并在飛行管中測定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用于肽質量指紋圖譜，非?？焖伲看畏治鲋恍?~5min），靈敏（達到fmol水平），可以精確測量肽段質量，但是如果在分析前不修飾肽段，MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。廣東PRM定量蛋白質組學研究方法