上海糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)：泛素是一種由76個(gè)氨基酸組成的多肽，在真核生物中高度保守，可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價(jià)連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記，泛素用親和標(biāo)簽（通常為6xHis）進(jìn)行標(biāo)記，并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu)，經(jīng)胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上，使肽的質(zhì)量增加114，因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)分離，使用針對(duì)特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。在早期的研究中，乙酰化修飾一直被認(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾。上海糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用：泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此，作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果，它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物，然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度，然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集，之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢(shì)：高特異性的修飾抗體；高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀；鑒定通量高；可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析。南京蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低，則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?；鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì)，如豆蔻?；?。由于對(duì)S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰(zhàn)性，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?；?。

乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向有什么？1、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷：生物標(biāo)志物，疾病機(jī)理機(jī)制，疾病分型，個(gè)性化治理等；2、生物醫(yī)藥：藥物作用機(jī)理，藥效評(píng)價(jià)，藥物開發(fā)等；3、微生物領(lǐng)域：致病機(jī)理，耐藥機(jī)制，病原體-宿主相互作用研究等；4、海洋水產(chǎn)：漁業(yè)資源，海水養(yǎng)殖，漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等；5、生物能源、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域：發(fā)酵過程優(yōu)化，生物燃料生產(chǎn)，環(huán)境危定風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究等；6、食品營(yíng)養(yǎng)：食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化，食品組分及品質(zhì)鑒定，功能性食品開發(fā)，食品安全監(jiān)檢測(cè)等。糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué)主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。

蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)：乙?；揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?，將乙酰CoA的乙?；鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上。蛋白質(zhì)乙?；彩且环N可逆的酶促反應(yīng)過程。乙酰基轉(zhuǎn)移酶可以將乙?；鶊F(tuán)(CH3C=O)從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)。同理,去乙酰化酶則可以逆轉(zhuǎn)這種反應(yīng)。蛋白質(zhì)上的賴氨酸乙酰化是細(xì)胞內(nèi)一種重要的PTMs過程。不僅發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等上，在細(xì)胞質(zhì)和線粒體中也存在著諸多蛋白的乙?；揎?。在植物研究領(lǐng)域內(nèi)，乙?；揎椫饕獏⑴c植物光合作用、生長(zhǎng)發(fā)育、脅迫響應(yīng)等過程。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，乙?；揎椏烧{(diào)節(jié)人體內(nèi)某種代謝酶，控制糖尿病，這一發(fā)現(xiàn)為糖尿病干預(yù)與療理帶來新的希望。泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么？南京蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)翻譯后修飾幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過程。上海糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究：泛素化修飾蛋白組學(xué)是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度，然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對(duì)富集得到的泛素化肽段樣品進(jìn)行定量分析。上海糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定