武漢Label free多肽組學應用

來源: 發(fā)布時間:2022-04-15

iTRAQ定量蛋白組學技術:iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。Label-free:Label-free定量,即非標記的定量蛋白質組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。蛋白質組學在生物學領域的研究中的應用是怎樣的?武漢Label free多肽組學應用

蛋白質組學研究內容有什么?對人類而言,蛋白質組學的研究要服務于人類的健康,主要指促進分子醫(yī)學的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質,而很多藥物的靶分子也是蛋白質。藥物也可以干預蛋白質-蛋白質相互作用。在基礎醫(yī)學和疾病機理研究中,了解人不同發(fā)育、生長期和不同生理、病理條件下及不同細胞類型的基因表達的特點具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關的分子,進一步為設計作用于特定靶分子的藥物奠定基礎。杭州定量N糖基化蛋白質組學蛋白質組學與其它學科的交叉也將推動新技術、新方法的發(fā)展。

蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。

iTRAQ/TMT標記定量蛋白質組技術優(yōu)勢:1、結果可靠:基于高靈敏度和高分辨的串聯質譜方法,定性與定量同步進行,同時得出定性和定量結果,重復樣品間的蛋白表達量相關性高;2、靈敏度高:分級分離,降低樣品復雜度,相比凝膠電泳觀測到的蛋白變化在2倍以上,iTRAQ計算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間,可檢測低豐度蛋白;3、分離能力強:可分離出酸/堿性蛋白,小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等;4、自動化程度高:液質聯用,自動化操作,分析速度快,分離效果好。目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進行蛋白質組學方面的應用性研究。

定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內標記和體外標記兩種。細胞內蛋白質組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。定量蛋白質組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜的混合體系中所有的蛋白質進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術,Labelfree定量蛋白組學技術是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。蛋白質組學現已被普遍應用于生命科學研究領域。杭州定量N糖基化蛋白質組學

蛋白質組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標有效的方法之一。武漢Label free多肽組學應用

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