廣東棕櫚?;揎椀鞍踪|組學分析研究

來源: 發(fā)布時間:2022-04-05

質譜分析蛋白翻譯后修飾:相對于蛋白質印跡等技術,質譜技術能更有效的對蛋白質的翻譯后修飾進行分析,且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進行補充。質譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾,因為質譜是通過蛋白質序列內的多個肽段來鑒定的,這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機會。一種提高質譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進行肽段富集,而不是使用PTM親和試劑進行蛋白富集,這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。蛋白質乙?;揎棧櫭剂x指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙?;鶊F。廣東棕櫚?;揎椀鞍踪|組學分析研究

蛋白質乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?;贵w對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對鑒定的乙?;稽c的生物學功能進行解釋預測。隨著蛋白質組研究的發(fā)展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調控過程,密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現(xiàn)實,借助這些組學研究手段能夠實現(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。湖北蛋白質磷酸化修飾組學分析研究蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程。

蛋白質磷酸化修飾組學技術:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的主要的信號轉導方式。目前已經知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。

蛋白質磷酸化修飾組學:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種比較普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉導方式。目前已經知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有靈活的特性。

乙?;揎椀鞍踪|組學分析:乙?;揎椀鞍踪|組學分析是指從蛋白質組學的水平分析蛋白質乙酰化修飾,包括乙?;鞍踪|的鑒定和定量。提供基于質譜的乙?;鞍捉M研究服務。蛋白質乙?;ńM蛋白乙?;头墙M蛋白乙?;?。組蛋白乙?;饕琴嚢彼嵋阴;?,已在基因轉錄調控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙酰化構成了哺乳動物細胞中乙?;鞍椎闹饕糠郑瑓⑴c了所有主要生物過程,包括蛋白質的定位、轉移、功能和降解,遺傳物質的轉錄和復制等。除了重要的生物學功能以外,乙?;鞍踪|及其調控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠涀冃挝蓙y、心血管疾病等)緊密相關。因此,對乙?;揎椀鞍踪|組進行研究有助于進一步探索細胞的生命活動與了解相關疾病的發(fā)病機制。質譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。湖北蛋白質磷酸化修飾組學分析研究

在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。廣東棕櫚酰化修飾蛋白質組學分析研究

質譜分析蛋白翻譯后修飾原理:相較于沒有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白,翻譯后修飾蛋白會在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的質譜分析過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析;通過質譜分析,得到的是一系列肽段的相對分子質量信息。對于某一個特定的肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的,當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,因為磷酸根的分子量也是確定的,所以在質譜檢測過程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,則可以假設這個肽段發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級或多級質譜的譜圖進行二次確認即可實現(xiàn)翻譯后修飾類型鑒定及修飾位點分析等。廣東棕櫚?;揎椀鞍踪|組學分析研究