蛋白質學組翻譯后修飾的研究策略：自中而下：自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法，分析組蛋白時其原理類似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時，通常需要將被檢測蛋白質消化成3-9kDa范圍內的肽段，因此也無法保證檢測到的肽段的完整性。但是，由于儀器的進步和保留了組蛋白尾部的組合修飾，自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下：自上而下技術可以直接對完整的蛋白質進行測序，包括翻譯后修飾的蛋白質和其他大的蛋白質片段，而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關的信息，使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。自上而下技術對蛋白質的有效分辨率已達到229kDa，一次可以檢測到的蛋白質數(shù)量也在增加。蛋白質磷酸化修飾組學具有探索性。濟南泛素化修飾蛋白質組學主要技術
蛋白質翻譯后修飾組學：翻譯后修飾自下而上分析策略：自下而上蛋白質組學是一種基于肽段分析的技術。對于不同類型的翻譯后修飾，具體的分析策略存在差異。蛋白質的糖基化具有異質性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上，不同位點可以連接到同一蛋白質上的不同糖鏈上。糖基化的異質性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質，在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶，導致信號分散。此外，對低豐度蛋白質的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳，質譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前，蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集，消除糖基化的異質性及其對質譜的影響，標記糖基化位點。濟南亞硝基化修飾蛋白質組學主要技術質譜可以分辨蛋白質修飾前和修飾后分子量上的變化。
蛋白翻譯后修飾組學技術在準確醫(yī)學中的應用：盡管目前大數(shù)據(jù)的獲得會采用基因組學和轉錄組學，但是關鍵的發(fā)現(xiàn)還是依賴蛋白質組數(shù)據(jù)而得到的。近來越來越多的研究表明蛋白組學驅動的準確的醫(yī)學具有極大的實用性和普適性，蛋白組學的研究更加速了臨床轉化的進程。蛋白翻譯后修飾（post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類的豐富性及蛋白功能的多樣化，研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾（磷酸化、泛素化、?；?、甲基化、SUMO化等）或蛋白酶裂解的新位點，還可以發(fā)現(xiàn)生物標記物及探索藥物/化學調節(jié)物的作用機制。
蛋白質磷酸化修飾鑒定方法：質譜鑒定法：在質譜分析中，先使試樣中各組分電離生成不同荷質比的離子，然后經加速電場的作用，生成離子束，進入質量分析器。在質量分析器中，在磁場的作用下，質荷比相同的離子會被聚焦到同一點上，不同質荷比的離子聚焦于不同點上，因此獲得區(qū)分不同質荷比離子的質譜圖。與未經修飾的肽段相比，磷酸基團修飾的肽段在相對分子質量上就會增加79.983，由此在質譜圖中能夠與未修飾肽段進行區(qū)分。固相金屬離子親和色譜利用的是磷酸基團與固相化的金屬離子有高親和力,可有效吸附磷酸化基團，從而達到富集磷酸化肽段的效果。鰲合底物上的金屬離子通常是Fe3+或Ga3+，可以選擇性地與磷酸化肽中的磷酸部分相結合,并且在高pH或磷酸緩沖液中磷酸化肽可以釋放出來。但是這個方法不能夠有效富集不與IMAC結合的磷酸化肽段。蛋白質發(fā)生翻譯后修飾時其分子質量會發(fā)生響應的改變，通過質譜能夠精確測定蛋白質或多肽的分子質量。
蛋白質修飾位點分析：基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質或多肽分子質量這一特性，從而檢測蛋白質或者多肽上位點發(fā)生何種修飾?？蓹z測修飾類型如下： 磷酸化、糖基化、乙?；?、泛素化、丙?；⒍□；?、丙二?；?、戊二?；?、琥珀?；?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化：信號轉導、細胞周期、生長發(fā)育機理等；2、糖基化：蛋白質折疊、更新以及免疫應答等；3、乙?；夯虮磉_調控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質穩(wěn)定性以及神經退行性的病變等；4、泛素化：細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA修復以及信號轉導等；5、甲基化：染色質結構及轉錄調控等；6、丙?；?/ 丙二?；?/ 戊二?；?/ 琥珀?；褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中，與代謝過程密切相關。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位。上海蛋白質丙?；揎椊M學鑒定
蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題？濟南泛素化修飾蛋白質組學主要技術
翻譯后修飾蛋白的檢測方法：翻譯后修飾蛋白的檢測技術包括有免疫沉淀、western blot、質譜技術、體外生化分析等。其中，免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關鍵步驟，它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標蛋白，之后再用western blot或質譜技術分析目標蛋白。Western blot和質譜技術均可用于蛋白質翻譯后修飾的下游檢測，其中Western blot相對簡單但依賴于特異性抗體且無法識別單個蛋白質變化，質譜則可以檢測包括未知PTM在內的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識來分析產生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體，以及有沒有目標等選擇合適的方法進行檢測。濟南泛素化修飾蛋白質組學主要技術
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