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翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質譜檢測過程中發(fā)現其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質譜圖進行二次確認。質譜可以分辨蛋白質修飾前和修飾后分子量上的變化。深圳蛋白質琥珀?;揎椊M學方法
蛋白質磷酸化修飾定義?在哺乳動物細胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質發(fā)生過磷酸化修飾,在脊椎動物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調節(jié)諸多信號通路進而參與調控生物體的生長、發(fā)育、逆境應激、疾病發(fā)生等多種生命過程,一直是生物學研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質發(fā)生翻譯后修飾的過程。四川丙二?;揎椀鞍踪|組學服務常見的蛋白質翻譯后修飾包括乙酰化。
蛋白質翻譯后修飾的檢測方法:質譜是蛋白質翻譯后修飾檢測的常用技術之一,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),如磷酸化、乙酰化、泛素化、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質組的復雜性。檢測蛋白質的翻譯后修飾,了解它們如何工作、影響蛋白質組和調控基因組將極大地提高我們對遺傳學和表觀遺傳學的理解。目標蛋白的PTMs研究通常需要一個富集步驟,因為修飾蛋白的豐度一般較低。大多數PTMs檢測方法都是結合富集策略開發(fā)的,以比較好的識別、驗證和研究目標蛋白中PTMs的功能。
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合,調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導致一系列疾病的發(fā)生。通過實驗的方法鑒定蛋白質翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應的優(yōu)化常常難以實現。而計算的方法則能夠快速、準確的預測酶特異性的底物蛋白質及其修飾位點。蛋白質有哪些翻譯后修飾?
蛋白質學組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質的化學修飾反應是在維持蛋白質的完整性和功能性的基礎上,通過基于其氨基酸殘基的化學反應獲得新的生物結合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側鏈或蛋白質的C端或N端。現有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質,以擴展20個標準氨基酸的化學組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學反應中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側鏈位點的一些亞甲基上。乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾。南京蛋白質糖基化修飾組學一般流程
蛋白質的翻譯后修飾調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。深圳蛋白質琥珀?;揎椊M學方法
翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質進行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質在翻譯中或翻譯后經歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團或通過蛋白質水解去基團而改變蛋白質的性質,調節(jié)蛋白質的功能。經過翻譯后修飾的蛋白質稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。深圳蛋白質琥珀酰化修飾組學方法
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