貴州動(dòng)物靶向代謝組學(xué)技術(shù)

代謝組學(xué)細(xì)胞樣本收集：懸浮細(xì)胞：1）連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到1.5 mL的進(jìn)口離心管中。2）低速離心5 min（低于3000 rpm），使細(xì)胞沉淀于離心管的底部（1*107個(gè)細(xì)胞為宜）。3）倒掉培養(yǎng)基（盡量倒干凈），用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗2 ~ 3次，低速離心5 min，棄上清。4）標(biāo)記離心管，將離心管的尖的一端插入液氮中，淬滅細(xì)胞沉淀1 min，-80 ℃凍存，干冰寄送。注意事項(xiàng)：1. 培養(yǎng)基傾倒時(shí)盡量倒干凈，可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈；2. 甲醇/水請(qǐng)使用色譜純及以上規(guī)格；3. 液氮淬滅細(xì)胞時(shí)，請(qǐng)小心避免離心管破碎導(dǎo)致樣本受損;4. 建議細(xì)胞樣本在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)多準(zhǔn)備樣本，以備后續(xù)使用。代謝組學(xué)著重研究的是生物整體、組織代謝途徑及其所受內(nèi)在或者外在因素的影響及隨時(shí)間變化的規(guī)律。貴州動(dòng)物靶向代謝組學(xué)技術(shù)

靶向代謝組學(xué)的一般分析流程為：1. 數(shù)據(jù)采集 第1步是得到標(biāo)準(zhǔn)品。如果無(wú)法從市場(chǎng)上買到，就必須定制合成。然后通過優(yōu)化產(chǎn)物離子碰撞能量以得到的信號(hào)，再通過測(cè)定三重串聯(lián)四極桿測(cè)定代謝物的 MRM 躍遷值。2. 定量 接下來(lái)用定量分析軟件對(duì) MRM 數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到報(bào)告。3. 統(tǒng)計(jì)分析和解釋 將定量報(bào)告輸入統(tǒng)計(jì)分析軟件包，用統(tǒng)計(jì)工具，如ANOVA，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。靶向分析：在基于質(zhì)譜的代謝組學(xué)分析中，要意識(shí)到離子強(qiáng)度和色譜保留時(shí)間都會(huì)隨著時(shí)間的推移而產(chǎn)生漂移，所以在實(shí)驗(yàn)中，要按隨機(jī)順序?qū)颖具M(jìn)行檢測(cè)，且數(shù)據(jù)需要在同天同一批次進(jìn)行采集，以減少誤差。河南脂質(zhì)代謝組學(xué)多研究在食品安全領(lǐng)域，利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動(dòng)植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。

代謝組學(xué)有哪些應(yīng)用？近年來(lái)，代謝組學(xué)技術(shù)得到了迅速發(fā)展，主要可應(yīng)用于：功能基因組學(xué)、疾病早期診斷、病因病機(jī)研究、藥物毒理學(xué)、中醫(yī)藥現(xiàn)代化、植物代謝組學(xué)、微生物代謝組學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。為什么要選擇代謝組學(xué)？首先需要明確的是代謝組學(xué)的目標(biāo)分析物主要為生物小分子及其代謝產(chǎn)物，如糖、有機(jī)酸、脂質(zhì)、維生素、氨基酸、芳香烴之類等化合物。所以，如果關(guān)注的是小分子物質(zhì)，那么采用代謝組學(xué)的方法，可以對(duì)樣品內(nèi)檢測(cè)到的小分子物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。同于基因組學(xué)和蛋白組學(xué)，代謝組學(xué)的研究反映某一時(shí)刻下正在發(fā)生的生命活動(dòng)情況，研究代謝物的表達(dá)量、代謝物與生理病理變化的關(guān)系，能夠幫助尋找新的生物標(biāo)記物，發(fā)現(xiàn)新的代謝途徑，以及更進(jìn)一步深入了解目前已知的這些途徑，應(yīng)用于疾病的早期診斷、藥物靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)、疾病的病理生理研究。

代謝組學(xué)概念：代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物（MW<1000）。 在食品安全領(lǐng)域，利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動(dòng)植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。其樣品主要是動(dòng)植物的細(xì)胞和組織的提取液。主要技術(shù)手段是核磁共振（NMR），質(zhì)譜（MS），色譜（HPLC，GC），其中以NMR為主。通過檢測(cè)一系列樣品的NMR 譜圖，再結(jié)合模式識(shí)別方法，可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài)，并有可能找出與之相關(guān)的生物標(biāo)志物（biomarker）。靶向代謝組學(xué)（Trgeted metabolomics）則為目標(biāo)性代謝組學(xué)。

代謝組學(xué)樣本收集注意事項(xiàng)：1.對(duì)于動(dòng)物組織樣本無(wú)法滿足50mg/樣，如海馬組織，大腦組織等，可考慮同組混樣以達(dá)到50mg/樣的要求。2.對(duì)于含水量高的果實(shí)進(jìn)行取樣很難保持高度均一性（如番茄的果皮、果肉等），建議將整個(gè)果實(shí)進(jìn)行液氮研磨后凍干混勻，對(duì)混勻后的粉末進(jìn)行稱重分裝，凍存。3.盡量不要使用錫箔紙以及自封袋包裝樣本，建議將樣本液氮研磨后使用離心管/凍存管進(jìn)行分裝。4.在使用PBS緩沖液/超純水進(jìn)行漂洗時(shí)，需要盡快處理。5.植物各類組織樣本建議都使用超純水進(jìn)行漂洗完之后，再研磨分裝凍存，防止因種植過程中施加的一些肥料、農(nóng)藥等含有表面活性劑或其他雜質(zhì)，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成影響。代謝組學(xué)的代謝產(chǎn)物是基因表達(dá)的產(chǎn)物。河南農(nóng)學(xué)靶向代謝組學(xué)分析方法

代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物（分子量<1000）。貴州動(dòng)物靶向代謝組學(xué)技術(shù)

代謝組學(xué)疾病診斷應(yīng)用： 代謝組學(xué)研究人員已經(jīng)對(duì)此進(jìn)行了研究。新生兒是否缺失酶基因，可以在出生時(shí)就檢測(cè)出來(lái)?？蓹z測(cè)出包括涉及合成途徑中的基本成分（如氨基酸）的酶。酶缺失的結(jié)果就是相應(yīng)的代謝產(chǎn)物過少或過多。尿癥（PKU）是一種常見的嬰兒疾病。這種疾病是由于缺失將苯丙氨酸水解成酪氨酸所必須的苯丙氨酸水解酶基因，導(dǎo)致血液中苯丙氨酸累積造成的。若是不能及時(shí)檢測(cè)出這種天生的代謝缺乏，在嬰兒出生后九個(gè)月內(nèi)，就會(huì)引起無(wú)法挽救的大腦損傷。這種疾病通過簡(jiǎn)單的血樣和尿素化驗(yàn)就可以確診。而血樣和尿素化驗(yàn)以后也將成為代謝指紋研究方法的一部分。像尿癥那樣的疾病，研究人員正試圖從疾病的生物化學(xué)基礎(chǔ)著手，而不是只有檢測(cè)生物標(biāo)記物。他們希望通過代謝組學(xué)，可以找到更好的方法去治這些疾病。貴州動(dòng)物靶向代謝組學(xué)技術(shù)

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