浙江磷酸化修飾蛋白質組學有哪些類型

來源: 發(fā)布時間:2022-03-24

蛋白質乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。浙江磷酸化修飾蛋白質組學有哪些類型

翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質譜圖進行二次確認。廣州蛋白質甲基化修飾組學蛋白質磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:能夠特異鑒定單個磷酸化位點。

蛋白質磷酸化修飾組學技術優(yōu)點:1、全方面性:磷酸化蛋白質組學以整個細胞蛋白為研究對象,研究內容包括了細胞內具有生命功能的蛋白,如細胞增生、細胞分裂和細胞分化等相關蛋白,因而研究更為全方面。2、可靠性:傳統(tǒng)的生物學研究蛋白質磷酸化往往針對特定條件,以兩個蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點,具有局限性,缺乏整體認識。磷酸化蛋白質組學則可檢測不同蛋白激酶及磷酸化酶對同一個蛋白磷酸化程度的影響,因而結果具有普遍性和可靠性。3、有效性:磷酸化蛋白質組學反映的是細胞內真實發(fā)生的事件,在一次試驗中考慮了不同變量,克服了生物學中逐步添加變量的缺陷。4、探索性:磷酸化蛋白質組學以細胞內蛋白為研究對象,相對于傳統(tǒng)的生物學研究以及蛋白質芯片,更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點和磷酸化蛋白質。如果可以聯(lián)合生物學技術,則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。

蛋白質翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程,是一種常見的蛋白質翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質,其中不乏存在一些糖基化蛋白質。而蛋白質糖基化修飾不只影響蛋白質的空間構象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉導等特定生物過程中發(fā)揮著至關重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。蛋白質磷酸化修飾組學具有全方面性。

蛋白質磷酸化修飾定義?在哺乳動物細胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質發(fā)生過磷酸化修飾,在脊椎動物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調節(jié)諸多信號通路進而參與調控生物體的生長、發(fā)育、逆境應激、疾病發(fā)生等多種生命過程,一直是生物學研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質發(fā)生翻譯后修飾的過程。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位。蛋白質泛素化修飾組學技術服務

蛋白質修飾可檢測修飾類型有磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙?;⒍□;?、丙二?;?。浙江磷酸化修飾蛋白質組學有哪些類型

蛋白質學組翻譯后修飾的研究策略:目前,有幾種分析蛋白質翻譯后修飾的策略,包括質譜(MS)、Eastern blotting、放射性標記和Western blotting。放射性標記和Western blotting是比較傳統(tǒng)、特異性和相對定量的方法。該過程需要事先知道翻譯后修飾類型。局限性包括抗體的特異性和可用性。質譜技術也常被用于翻譯后修飾分析,不受修飾類型和相關修飾位點的現(xiàn)有知識的限制。自下而上:自下而上的技術是蛋白質組學研究中使用的質譜策略之一。在根據(jù)序列鑒定肽之前,需要使用蛋白酶消化蛋白質。由于該技術不能保證在檢測過程中被檢測肽的完整性和穩(wěn)定性,因此無法獲得不同蛋白質翻譯后修飾之間關系的信息,這意味著它無法檢測到某些修飾。因此,該方法不適用于分析組蛋白的組合翻譯后修飾。浙江磷酸化修飾蛋白質組學有哪些類型

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