浙江乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

來源: 發(fā)布時間:2022-03-22

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學(xué)定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學(xué)定量)。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町悾Ξa(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進行解釋。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。浙江乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化,許多至關(guān)重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集。上海蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)目前對乙?;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯毎D(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面。

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)技術(shù):乙?;揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,對細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用。此外,還存在的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過抗體富集乙?;碾亩危瑥亩鴮崿F(xiàn)乙?;蔫b定及定量。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個以上可見考染條帶。2、溶液(目標蛋白質(zhì)):目標蛋白總量>50μg,目標蛋白濃度>80%。3、溶液(大規(guī)?;旌系鞍踪|(zhì)):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。在眾多乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì)中,研究較多的要數(shù)細胞核中包圍DNA的組蛋白了。

蛋白質(zhì)乙?;揎椀墓δ埽耗壳皩σ阴;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯毎D(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面。在眾多乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì)中,研究較多的要數(shù)細胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構(gòu)成核小體,組蛋白的甲基化、乙?;揎椖軌蛘{(diào)節(jié)DNA纏繞的松緊度,從而對基因表達進行調(diào)控,因此,組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學(xué)研究中的重要一環(huán)。另外,研究也發(fā)現(xiàn)乙?;揎椘毡榇嬖谟谌说亩喾N代謝酶之中,并且參與調(diào)控代謝通路以及代謝酶的活性。其中在肝臟這樣的代謝中就存在著多種代謝酶被高度乙?;?。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。浙江乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。浙江乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

質(zhì)譜分析乙酰化蛋白質(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M行鑒定、乙?;稽c定位以及定量。當質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時,因為乙?;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,需要先對乙?;亩芜M行富集,然后再對富集得到的乙?;亩螛悠愤M行定量分析。質(zhì)譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩?,在酶切過程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。浙江乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

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