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LC-MS非靶向代謝組學:LCMS非靶向是通過液質聯(lián)用(LC–MS)方法檢測生物體受擾動或刺激前后大量代謝產(chǎn)物的動態(tài)變化,從中找出表達差異的代謝物,進而闡明生物體代謝相關過程的代謝組學技術。LCMS非靶向代謝組學適用于分析難揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的代謝產(chǎn)物,具有高通量、高分辨率、高靈敏度的特點。超高壓液相色譜或超高效液相色譜(UPLC)通過采用更小粒徑的色譜填料配合更高的壓力,實現(xiàn)了更好的分離,具體包括更高的分離能力、更快的分離速度以及更好的靈敏度;串聯(lián)質譜儀在MS掃描模式下,可實現(xiàn)高低碰撞能量快速切換,同時采集代謝物的一二級質譜信息,結合代謝組學數(shù)據(jù)處理軟件對質譜信息的解析,在單次分析中可檢測和鑒定幾百至幾千種代謝物。代謝組學技術可應用于藥物毒理學。非靶向代謝組學費用
什么是代謝組學?代謝組學是用來解決什么問題的?代謝組學(Metabonomics/Metabolomics)是發(fā)展起來的一門新興學科,是研究關于生物體被擾動后(如基因的改變或環(huán)境變化后)其代謝產(chǎn)物(內源性代謝物質)種類、數(shù)量及其變化規(guī)律的科學。代謝組學著重研究的是生物整體、組織的內源性代謝物質的代謝途徑及其所受內在或者外在因素的影響及隨時間變化的規(guī)律。代謝組學通過揭示內在和外在因素影響下代謝整體的變化軌跡來反映某種病理生理過程中所發(fā)生的一系列生物事件。深圳農(nóng)學靶向代謝組學非靶向代謝組學無偏向性地對所有小分子代謝物(一般相對分子量小于1000)。
代謝組學樣本收集植物組織:果實、種子:1)對于含水量高、體積較大的果實(番茄、西瓜、蘋果等)需要先將樣品分成“均勻”的小塊(≈ 200 mg/樣本)分裝至2 mL離心管中,標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。2)對于細小的顆粒種子(擬南芥種子、谷物種子等),可以先將同一組的植株種子混勻后再分裝(≈ 200 mg/樣本)至離心管中,標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。3)對于要求對整個果實進行提取的(整粒葡萄等),需要把果實裝在50 mL離心管/自封袋中,標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15min,-80 ℃凍存,干冰寄送。
代謝組學樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請咨詢譜領工作人員。代謝組學與臨床化學較為相似。
代謝組學如何控制臨床樣本的質量?對于臨床的樣本建議每組比較低的25個生物學重復,達到30例以上比較好。因為臨床樣本受外界環(huán)境和遺傳背景影響較大,需要很多生物學重復來消除這些外在影響。此外,在樣本收集過程中,應保持收養(yǎng)的時間段和操作程序盡可能一致。代謝組學樣本收集取樣基本原則:表示性和一致性:驗組與對照組樣本在取材部位、時間處理等方面盡可能保持一致,從而保證實驗的可信度;迅速性:操作過程迅速,很大限度縮短樣本采集到實驗的時間;低溫原則:所有樣本離體后,分離步驟應在4℃或冰上進行,分離好的樣本立即存于-80℃,以免樣本產(chǎn)生進一步代謝活動。代謝組學是對某一生物或細胞中相對分子量小于1,000的小分子代謝產(chǎn)物進行定性和定量分析的一門新學科。四川LC-MS/MS非靶向脂質組學分析方法
靶向代謝組學(Trgeted metabolomics)則為目標性代謝組學。非靶向代謝組學費用
代謝組學疾病診斷應用:與基因組學和蛋白質組學相比, 代謝組學的研究側重于相關特定組分的共性,是要涉及研究每一個代謝組分的共性、特性和規(guī)律,目前據(jù)此目標相距甚遠。盡管充滿了挑戰(zhàn),研究人員仍然堅信,與基因組學和蛋白質組學相比,代謝組學與生理學的聯(lián)系更加緊密。疾病導致機體病理生理過程變化,引起代謝產(chǎn)物發(fā)生相應的改變,通過對某些代謝產(chǎn)物進行分析,并與 正常人的代謝產(chǎn)物比較,尋找疾病的生物標記物,將提供一種較好的疾病診斷方法。非靶向代謝組學費用
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