南京棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析價(jià)格

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-08

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。南京棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析價(jià)格

蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性,從而檢測(cè)蛋白質(zhì)或者多肽上位點(diǎn)發(fā)生何種修飾??蓹z測(cè)修飾類(lèi)型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙酰化、丁?;?、丙二酰化、戊二?;㈢牾;?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等;2、糖基化:蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等;3、乙?;夯虮磉_(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等;4、泛素化:細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等;5、甲基化:染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等;6、丙酰化 / 丙二?;?/ 戊二?;?/ 琥珀酰化:主要存在于線粒體和細(xì)菌中,與代謝過(guò)程密切相關(guān)。貴州蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)研究泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。

蛋白質(zhì)乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對(duì)乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?;亩芜M(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對(duì)鑒定的乙?;稽c(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè)。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到,對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程,密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過(guò)連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬(如Mn2+)配合物對(duì)磷酸基團(tuán)的親和,造成磷酸化蛋白遷移的滯留,再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用相應(yīng)蛋白的抗體識(shí)別,根據(jù)遷移滯留檢測(cè)蛋白磷酸化。技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):1、無(wú)放射危害。2、鑒定不受限于特異性識(shí)別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析。4、與質(zhì)譜鑒定兼容,進(jìn)行更為精細(xì)的分析鑒定。蛋白質(zhì)磷酸化修飾怎么定義?

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù):技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)。1、 檢測(cè)特異性高。2、能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。同位素標(biāo)記(Isotope Labeled)結(jié)合免疫印跡法:此方法的原理是當(dāng)?shù)鞍装l(fā)生磷酸化時(shí),放射性32P的摻入和分子質(zhì)量變化引起的凝膠遷移(gelshift),再通過(guò)免疫印跡方法檢測(cè)同位素標(biāo)記,從而達(dá)到鑒定磷酸化蛋白的目的。技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):1、檢測(cè)技術(shù)靈敏并且直觀。2、常用于體外磷酸化反應(yīng)結(jié)果檢測(cè)。3、 磷酸化鑒定不受抗體限制。4、可同時(shí)分析多個(gè)蛋白磷酸化。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。貴州蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有靈活的特性。南京棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析價(jià)格

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的研究策略:自中而下:自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法,分析組蛋白時(shí)其原理類(lèi)似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時(shí),通常需要將被檢測(cè)蛋白質(zhì)消化成3-9kDa范圍內(nèi)的肽段,因此也無(wú)法保證檢測(cè)到的肽段的完整性。但是,由于儀器的進(jìn)步和保留了組蛋白尾部的組合修飾,自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下:自上而下技術(shù)可以直接對(duì)完整的蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)序,包括翻譯后修飾的蛋白質(zhì)和其他大的蛋白質(zhì)片段,而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關(guān)的信息,使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。自上而下技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)的有效分辨率已達(dá)到229kDa,一次可以檢測(cè)到的蛋白質(zhì)數(shù)量也在增加。南京棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析價(jià)格

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