代謝組學研究方法:代謝組學的研究方法與蛋白質(zhì)組學的方法類似,通常有兩種方法。一種方法稱作代謝物指紋分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)的方法,比較不同血樣中各自的代謝產(chǎn)物以確定其中所有的代謝產(chǎn)物。從本質(zhì)上來說,代謝指紋分析涉及比較不同個體中代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜峰,然后了解不同化合物的結(jié)構,建立一套完備的識別這些不同化合物特征的分析方法。另一種方法是代謝輪廓分析(metabolomic profiling),研究人員假定了一條特定的代謝途徑,并對此進行更深入的研究。代謝組學技術可應用于功能基因組學。哈爾濱動物靶向代謝組學服務
GC-MS非靶向代謝組學能檢測到哪些類別的代謝物?衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測分析范圍。GC/MS能檢測到有機酸、氨基酸、單糖、糖醇、胺類、脂肪酸、吲哚、單甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和膽汁酸等代謝物。如何提高定性準確度?GC/MS的定性有雙重標準,一是保留指數(shù),二是質(zhì)譜信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的軟電離源,GC/MS使用的EI源屬于硬電離,能量較強且穩(wěn)定,在將代謝物分子電離后,分子離子峰進一步碎裂產(chǎn)生豐富的碎片離子。因此,我們很難在GC/MS上看到分子離子峰。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”,將儀器得到的實際指紋圖譜和質(zhì)譜庫(如NIST庫)進行比對后,我們將會得到一個叫相似度的指標。保留指數(shù)和相似度都必須滿足設定的閾值,軟件才會給出色譜峰的定性結(jié)果。然后采用標準品質(zhì)譜信息進行完全比對定性,也就是說只有經(jīng)過標準品比對,代謝物才是被100%定性。四川LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學研究代謝組學是用來解決什么問題的?
GC-MS非靶向代謝組學醫(yī)學分析生物樣本為何要衍生化處理?有哪些衍生化的方法?GC的流動相為氣體(通常為高純氦),這就要求被分析物必須能夠氣化,而生物樣本中很多內(nèi)源性代謝物都含有極性基團,具有沸點高、不易氣化特點。衍生化能夠降低這些代謝物的沸點,增加它們的熱穩(wěn)定性,以便分析能夠順利進行。衍生化方法及試劑種類繁多,根據(jù)不同的分析目標,需選擇合適的衍生化方法。如分析脂肪酸,我們可以采用甲酯化衍生。在GC/MS代謝平臺上,比較常用的衍生化方法是硅烷化衍生,因為它的廣譜高效。在進行硅烷化衍生之前,還需添加甲氧胺吡啶溶液,以封閉羰基(針對α-酮酸和糖類,保護作用),減少衍生化副產(chǎn)物的生成。
代謝組學樣本收集植物組織:葉片、莖、花:1)取整片葉片/一段莖/一朵花,放入離心管或錫箔紙中并標記,迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。2)將裝有樣本的離心管迅速放入自封袋中(每組一袋),在自封袋中放入標簽紙注明樣本信息。3)迅速放入-80 ℃冰箱凍存。足量干冰寄送。注意:(1)采集葉片樣本時,在中午光照好的時間收集。(2)采集樣本時保持樣本一致性,尤其是同一組樣本(顏色、衰老程度、葉脈占比、光照、位置等)。根:1)取整株植物的根部,迅速用PBS緩沖液或者超純水漂洗掉根上的泥土、培養(yǎng)基或營養(yǎng)液等;2)吸水紙吸干水分后,分裝為500 mg/管;3)標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。代謝組學主要技術手段是核磁共振。
代謝組學(英語:metabolomics)是對細胞,生物流體,組織或生物體內(nèi)的小分子(通常稱為代謝物,metabolites)的大規(guī)模研究。 這些小分子及其在生物系統(tǒng)中的相互作用統(tǒng)稱為代謝組。能夠?qū)ι飿颖局械拇x物進行全方面分析的一項新興技術,被定義為代謝組學技術。代謝組學是在后基因組學時代興起的一門跨領域?qū)W科,其主要目標是定量的研究生命體對外界刺激、病理生理變化、以及本身基因突變而產(chǎn)生的其體內(nèi)代謝物水平的多元動態(tài)反應。之后得到迅速發(fā)展并滲透到多項領域,比如疾病診斷、醫(yī)藥研制開發(fā)、營養(yǎng)食品科學、毒理學、環(huán)境學,植物學等與人類健康護理密切相關的領域。代謝組學技術可應用于病因病機研究。貴陽農(nóng)學靶向代謝組學質(zhì)譜分析
代謝組學主要研究的是各種代謝路徑的底物。哈爾濱動物靶向代謝組學服務
代謝組學如何控制臨床樣本的質(zhì)量?對于臨床的樣本建議每組比較低的25個生物學重復,達到30例以上比較好。因為臨床樣本受外界環(huán)境和遺傳背景影響較大,需要很多生物學重復來消除這些外在影響。此外,在樣本收集過程中,應保持收養(yǎng)的時間段和操作程序盡可能一致。代謝組學樣本收集取樣基本原則:表示性和一致性:驗組與對照組樣本在取材部位、時間處理等方面盡可能保持一致,從而保證實驗的可信度;迅速性:操作過程迅速,很大限度縮短樣本采集到實驗的時間;低溫原則:所有樣本離體后,分離步驟應在4℃或冰上進行,分離好的樣本立即存于-80℃,以免樣本產(chǎn)生進一步代謝活動。哈爾濱動物靶向代謝組學服務
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