武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)乙酰化修飾鑒定流程：1. 組織/細胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?；贵w對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙?；亩芜M行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析，并對鑒定的乙?；稽c的生物學(xué)功能進行解釋預(yù)測。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展，我們越來越深刻地意識到，對于生物體生命活動的管理和調(diào)控過程，密切相關(guān)的不只是單個蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài)，更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實，借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?；?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計抑制劑,用于疾病的診療。北京琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)類型質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對于大部分的蛋白質(zhì)來說，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個過程調(diào)節(jié)細胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄，并影響表觀遺傳學(xué)。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化，許多至關(guān)重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制，更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控，因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時，發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣，所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的功能。

蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾？作用機制和生物學(xué)功能是什么？前體蛋白是沒有活性的，常常要進行一個系列的翻譯后加工，才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的，一般分為以下幾種：N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和剪切。當(dāng)合成蛋白質(zhì)時，20種不同的氨基酸會組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學(xué)官能團（如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類及碳水化合物）會附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，或是造成結(jié)構(gòu)的改變（如建立雙硫鍵），來擴闊蛋白質(zhì)的功能。再者，酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸，或從中間將肽鏈剪開。舉例來說，胰島素它會在建立雙硫鍵后被剪開兩次，并在鏈的中間移走多肽前體，而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括糖基化。北京琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)類型

常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白磷酸化檢測方法：質(zhì)譜檢測方法優(yōu)勢：1. 準(zhǔn)確度高，能夠同時檢測多個蛋白的多個磷酸化位點。2. 適用于大規(guī)模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體。在實際應(yīng)用中，Western Blot與質(zhì)譜分析方法各有各的好，誰也無法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測定磷酸化修飾的時候還應(yīng)該根據(jù)具體需要來決定。如果研究的蛋白正好有商業(yè)化的磷酸化抗體，那么lucky you，你可以選擇Western Blot進行快速磷酸化測定研究。但是如果你所研究的蛋白質(zhì)沒有可用的商業(yè)化磷酸抗體，或是抗體價效過低，亦或是需要大規(guī)模地檢測細胞內(nèi)磷酸化蛋白的水平的話，質(zhì)譜檢測會是更好地選擇。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)

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