染色體非整倍性是指細(xì)胞中染色體數(shù)目異常,即染色體數(shù)目不是正常二倍體數(shù)目的整數(shù)倍。這種異常在多種疾病中都可見(jiàn),包括遺傳性疾病和不孕不育等。紡錘體是細(xì)胞分裂過(guò)程中負(fù)責(zé)染色體分離的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),其功能缺陷可能導(dǎo)致染色體非整倍性的發(fā)生。紡錘體是由微管、動(dòng)力蛋白和調(diào)節(jié)蛋白等組成的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu),負(fù)責(zé)在有絲分裂和減數(shù)分裂過(guò)程中確保染色體的正確分離和分配。紡錘體的主要功能包括:染色體捕捉:紡錘體通過(guò)動(dòng)粒微管(kinetochoremicrotubules)捕捉染色體的著絲粒,確保染色體在分裂中期排列在赤道板上。染色體分離:紡錘體通過(guò)極微管(polarmicrotubules)和動(dòng)粒微管的動(dòng)態(tài)變化,推動(dòng)染色體在分裂后期向兩極移動(dòng),實(shí)現(xiàn)染色體的均等分配。細(xì)胞分裂:紡錘體還參與細(xì)胞分裂的其他過(guò)程,如細(xì)胞質(zhì)分裂(cytokinesis)。 紡錘體在細(xì)胞分裂中的精確調(diào)控是生物體發(fā)育的基礎(chǔ)。美國(guó)Hamilton Thorne紡錘體加熱臺(tái)
紡錘體觀測(cè)儀使ICSI更加安全可靠在進(jìn)行單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)授精時(shí),**初人們觀察人體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞時(shí),通常認(rèn)為,卵母細(xì)胞紡錘**于***極體附近,故傳統(tǒng)的ICSI操作是轉(zhuǎn)動(dòng)卵母細(xì)胞使其***極**于6點(diǎn)或12點(diǎn)處,然后在3點(diǎn)處注入精子。但是,在大量使用紡錘體觀測(cè)儀后發(fā)現(xiàn),***極體并不能很好地預(yù)測(cè)紡錘體的位置。一項(xiàng)研究提示,在ICSI后,用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體與***極體的夾角,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小于30°這組卵母細(xì)胞的正常受精率更高。極體在卵周隙中的移動(dòng),或者紡錘體在胞質(zhì)中的易位都使兩者的位置關(guān)系發(fā)生改變,普通光學(xué)顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇,可能會(huì)損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常。通過(guò)紡錘體觀測(cè)儀,可以精確地對(duì)卵母細(xì)胞中紡錘體的位置進(jìn)行定位,從而避免在ICSI過(guò)程中損傷紡錘體,使ICSI更加安全可靠。有文獻(xiàn)報(bào)道,在進(jìn)行ICSI時(shí),觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細(xì)胞的受精率和質(zhì)量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn),有些卵母細(xì)胞在普通光學(xué)顯微鏡下看到是正常的,但在紡錘體觀測(cè)儀這個(gè)“照妖鏡”下,就能顯出原形,表現(xiàn)為有***極體、但缺乏雙折射的紡錘體,這類(lèi)卵母細(xì)胞ICSI后的受精率和妊娠率極低。卵母細(xì)胞紡錘體卵冷凍研究紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞分裂過(guò)程中引人注目的現(xiàn)象之一。
紡錘體,顧名思義,其形狀類(lèi)似于紡織用的紡錘,是在細(xì)胞分裂前初期到末期形成的一種特殊細(xì)胞器。它的主要元件包括微管、附著微管的動(dòng)力分子分子馬達(dá),以及一系列復(fù)雜的超分子結(jié)構(gòu)。微管是紡錘體的基礎(chǔ)骨架,由αβ-微管蛋白二聚體組成,這些微管相互交錯(cuò),形成紡錘狀結(jié)構(gòu),將染色體緊密地聯(lián)系在一起。在動(dòng)物細(xì)胞中,紡錘體的形成和組裝通常由中心體引導(dǎo)和控制。中心體是一個(gè)位于細(xì)胞質(zhì)中的復(fù)合體,由兩個(gè)中心粒嵌套在被稱(chēng)為pericentriolarmaterial(PCM)的區(qū)域內(nèi)組成。PCM富含微管相關(guān)蛋白和其他蛋白質(zhì),如谷氨酸脫羧酶等微管主要蛋白,這些蛋白質(zhì)共同協(xié)作,確保紡錘體的正確組裝和穩(wěn)定。相比之下,高等植物細(xì)胞的紡錘體并不包含中心體,而是由細(xì)胞極板附近的微管組織形成。
秋水仙素為什么會(huì)使有絲分裂的細(xì)胞停滯于中期如果用秋水仙素處理有絲分裂的細(xì)胞,紡錘體會(huì)迅速消失,細(xì)胞停滯在有絲分裂中期,染色體無(wú)法分離成兩組。用秋水仙堿進(jìn)行誘導(dǎo),從而將細(xì)胞阻斷在細(xì)胞分裂中期,也是誘導(dǎo)細(xì)胞周期同步化的重要方法之一。真核細(xì)胞周期可分為4個(gè)時(shí)期,分別是G1期、S期、G2期和M期。在細(xì)胞周期調(diào)控中主要有3個(gè)控制點(diǎn),***個(gè)控制點(diǎn)在G1期,決定細(xì)胞能否進(jìn)入S期;第二個(gè)控制點(diǎn)在G2期,決定細(xì)胞能否進(jìn)入有絲分裂期;第三個(gè)控制點(diǎn)在M期,決定細(xì)胞是否已經(jīng)準(zhǔn)備好將復(fù)制好的染色體拉向兩極。CDK(周期蛋白依賴(lài)性蛋白激酶)對(duì)細(xì)胞周期運(yùn)行起著**性調(diào)控作用,CDK與不同時(shí)期的周期蛋白結(jié)合會(huì)在特定周期起調(diào)節(jié)作用。cyclinA、cyclinB是在M期起調(diào)節(jié)功能的兩種主要周期蛋白。細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)到分裂中期后,在后期促進(jìn)復(fù)合物(APC)的作用下,M期cyclinA和cyclinB通過(guò)泛素化途徑迅速降解,Cdkl活性喪失,細(xì)胞周期便從M期中期向后期轉(zhuǎn)化。APC活性變化是細(xì)胞周期由分裂中期向后期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵因素,其活性受到多種因素的綜合調(diào)節(jié),紡錘體組裝檢查點(diǎn)是其重要的調(diào)控因素。紡錘體組裝不完全,或所有動(dòng)粒不能被動(dòng)粒微管全部捕捉,則APC不能被***。紡錘體微管的穩(wěn)定性受到細(xì)胞內(nèi)外多種信號(hào)的調(diào)節(jié)。
近年來(lái),隨著成像技術(shù)的飛速發(fā)展,特別是紡錘體成像技術(shù)的不斷進(jìn)步,科學(xué)家們得以在高分辨率下觀測(cè)細(xì)胞分裂過(guò)程,從而揭示了紡錘體的許多未知特征和機(jī)制。紡錘體成像技術(shù)的發(fā)展可以追溯到上世紀(jì)末,當(dāng)時(shí)科學(xué)家們開(kāi)始利用熒光顯微鏡技術(shù)觀測(cè)細(xì)胞分裂過(guò)程。然而,由于傳統(tǒng)熒光顯微鏡的分辨率限制,紡錘體的精細(xì)結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)變化往往難以被清晰捕捉。為了克服這一難題,科學(xué)家們開(kāi)始探索更高分辨率的成像技術(shù),如電子顯微鏡、超分辨率顯微鏡等。然而,這些技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中面臨著諸多挑戰(zhàn),如樣品制備復(fù)雜、成像速度慢、對(duì)細(xì)胞活性影響大等。近年來(lái),隨著成像技術(shù)的不斷創(chuàng)新和進(jìn)步,紡錘體成像技術(shù)取得了突破性進(jìn)展。特別是超分辨率顯微鏡技術(shù)的出現(xiàn),如結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡(SIM)、受激輻射損耗顯微鏡(STED)和單分子定位顯微鏡(SMLM)等,使得科學(xué)家們能夠在納米尺度上觀測(cè)紡錘體的精細(xì)結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)變化。 紡錘體在細(xì)胞分裂末期逐漸解體,為細(xì)胞質(zhì)分裂做準(zhǔn)備。武漢卵母細(xì)胞紡錘體揭示卵母細(xì)胞關(guān)鍵結(jié)構(gòu)
紡錘體在細(xì)胞分裂中的功能受到嚴(yán)格的時(shí)間和空間控制。美國(guó)Hamilton Thorne紡錘體加熱臺(tái)
選擇合適的冷凍保護(hù)劑是減少冷凍損傷的關(guān)鍵。然而,不同濃度的冷凍保護(hù)劑對(duì)MI期卵母細(xì)胞紡錘體的影響各異,需要通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。此外,冷凍保護(hù)劑的滲透性和毒性也是需要考慮的因素。冷凍和解凍過(guò)程中的溫度控制、時(shí)間控制以及操作手法等都會(huì)對(duì)MI期卵母細(xì)胞的紡錘體造成影響。因此,需要不斷優(yōu)化冷凍和解凍程序,以減少對(duì)紡錘體的損傷。近年來(lái),研究者們通過(guò)不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方,取得了進(jìn)展。例如,一些研究表明,使用高濃度的蔗糖作為冷凍保護(hù)劑可以提高M(jìn)I期卵母細(xì)胞的存活率和紡錘體穩(wěn)定性。此外,還有一些新型冷凍保護(hù)劑如乙二醇、丙二醇等也被應(yīng)用于MI期卵母細(xì)胞的冷凍保存中。美國(guó)Hamilton Thorne紡錘體加熱臺(tái)