通過(guò)比較進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估1.室內(nèi)比較是采用同一個(gè)標(biāo)本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測(cè)定后?應(yīng)用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)測(cè)得數(shù)值進(jìn)行比較。在男科實(shí)驗(yàn)室中對(duì)CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標(biāo)本進(jìn)行日間比較。當(dāng)室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評(píng)估時(shí)?計(jì)算機(jī)中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢(shì)的。2.室間比較要求標(biāo)本向其他幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)送文獻(xiàn)中的一些報(bào)道闡述了該方面的經(jīng)驗(yàn)但是運(yùn)動(dòng)精子是不能在不受限制的條件下運(yùn)輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\(yùn)送需進(jìn)一步考慮更多的因素(解凍技術(shù)、標(biāo)本的處理等)這些因素會(huì)影響活動(dòng)力參數(shù);到目前為止室間比較的研究還未見(jiàn)滿意報(bào)道;Jorgensen等進(jìn)行了研究嘗試克服實(shí)驗(yàn)室間運(yùn)送解凍標(biāo)本的困難其研究方式是:邀請(qǐng)四個(gè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)人員攜帶各自的儀器到同一個(gè)地點(diǎn)以各自通常采用的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行精子評(píng)估但未見(jiàn)明確的結(jié)論。3.對(duì)于精子活力測(cè)定CASA系統(tǒng)的測(cè)定與直觀評(píng)估的比較有文獻(xiàn)進(jìn)行了報(bào)道但結(jié)果并不相同。認(rèn)為直觀評(píng)估揭示標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯(cuò)誤引起的該觀點(diǎn)是不正確的;無(wú)論從理論上還是實(shí)踐中CASA數(shù)值比直觀評(píng)估所獲得的數(shù)值更接近于真值;對(duì)直線前進(jìn)的精子比例而言這一點(diǎn)是非常正確的。CASA系統(tǒng)減少了人為因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,提高了檢測(cè)的客觀性和可重復(fù)性?。上海水生動(dòng)物精子分析頻閃光源
精子分析儀工作原理以灰度識(shí)別CASA為例,采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合,**標(biāo)本液化后吸入計(jì)數(shù),通過(guò)顯微鏡放大后,用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動(dòng)、靜態(tài)圖像后輸入計(jì)算機(jī)。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運(yùn)動(dòng)移位及運(yùn)動(dòng)參數(shù),對(duì)采集圖像進(jìn)行精子密度、活動(dòng)力、活動(dòng)率、運(yùn)動(dòng)特征等幾十項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目動(dòng)態(tài)分析,由計(jì)算機(jī)處理后,打印出“**分析檢查報(bào)告以及精子動(dòng)態(tài)特征分布圖”。一次能對(duì)1000個(gè)精子進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)分析,2-3分鐘即可完成檢測(cè)[1]。優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,用量少,檢測(cè)速度快,重復(fù)性優(yōu)于人工檢測(cè),并且能夠快速、準(zhǔn)確的測(cè)定精子密度、活力、精子分級(jí)等,還可提供精子運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的多種參數(shù)等。缺點(diǎn):影響分析結(jié)果的因素較多,除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外,不同的精子計(jì)數(shù)池的相對(duì)準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果。上海水生動(dòng)物精子分析頻閃光源HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),鞭打頻率(BCF)?:精子曲線路徑跨越其平均路徑的平均頻率。
在精子形態(tài)學(xué)檢查中,通過(guò)CASA系統(tǒng)對(duì)精子形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行分析,有些特征(細(xì)胞大小、形狀、光學(xué)密度、尾的存在以及其它)可由操作者選擇,這樣就會(huì)引起同一標(biāo)本在不同實(shí)驗(yàn)室或不同分析者測(cè)得的結(jié)果一致性較差[10]。4結(jié)論和展望計(jì)算機(jī)輔助**分析具有較好的可靠性、重復(fù)性和穩(wěn)定性,與傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡目測(cè)估計(jì)相比,更具有快速方便、對(duì)比性強(qiáng)、便于交流等明顯優(yōu)點(diǎn)[11],常規(guī)**檢查無(wú)法測(cè)定精子微細(xì)運(yùn)動(dòng)特點(diǎn),顯示CASA在男性不育癥診斷篩選中的優(yōu)越性。王益鑫亦發(fā)現(xiàn),部分手工**檢查正常的不育患者,進(jìn)行**全自動(dòng)分析及生化檢測(cè),均發(fā)現(xiàn)明顯異常[12]。因此,CASA系統(tǒng)在男性生殖能力檢驗(yàn)方面具有重要的實(shí)際應(yīng)用意義。
CASA,即計(jì)算機(jī)輔助精子分析,是一種利用技術(shù)手段對(duì)精子活力、濃度和形態(tài)進(jìn)行精確評(píng)估的方法。WHO第五版指南強(qiáng)調(diào),相比人工檢測(cè),CASA提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)和精子動(dòng)力學(xué)參數(shù),如前向運(yùn)動(dòng)和超活化運(yùn)動(dòng),以及獲能精子特征參數(shù)。研究顯示,CASA檢測(cè)的精子參數(shù)與體內(nèi)外受精成功率和受孕時(shí)間有***關(guān)聯(lián)。使用CASA分析儀,通常通過(guò)相差顯微鏡識(shí)別活動(dòng)精子,適用于精子動(dòng)力學(xué)分析。但要確??煽拷Y(jié)果,操作者需注意標(biāo)本制備、幀頻率、精子濃度等因素。每份樣本至少需要分析200個(gè)活動(dòng)精子的運(yùn)動(dòng)軌跡,更多精子樣本有助于分類和變異性的分析。國(guó)內(nèi)已有自主研發(fā)的精子分析儀,通常進(jìn)行兩次分析,每次至少200個(gè)精子,結(jié)果通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出。CASA在評(píng)估精子濃度時(shí),需精確測(cè)量精子體積,確保**完全液化并充分混勻。計(jì)數(shù)板的精確性和計(jì)數(shù)一致性是關(guān)鍵,每次檢測(cè)需滿足5個(gè)視野和200條以上精子的比較低要求。對(duì)于高濃度**,可能需要稀釋以減少誤差。形態(tài)分析方面,CASA能夠定量評(píng)估精子頭部、中段和主段,尾部缺陷可通過(guò)活力評(píng)估。對(duì)于碎片過(guò)多或黏稠的**,可能需要洗滌以減少背景干擾。CASA中涉及一系列術(shù)語(yǔ),如VCL(曲線速度)、VSL(直線速度)等,它們反映了精子運(yùn)動(dòng)的不同特性。CASA系統(tǒng)操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)速度快,且重復(fù)性優(yōu)于人工檢測(cè)。
前沿性檢查:目前不作為生育力低下男性初步評(píng)估的常規(guī)方法。這一部分包括了非常專業(yè)化的、主要用于研究的方法和其他新興檢測(cè)技術(shù)。有研究認(rèn)為,氧化應(yīng)激可能是影響人類精子功能和妊娠結(jié)局的重要因素;新的證據(jù)也表明了精子DNA完整性和染色質(zhì)組裝與生育力的關(guān)系。前沿性檢查一節(jié)中詳細(xì)介紹了精子氧化應(yīng)激和活性氧實(shí)驗(yàn)、精子染色質(zhì)檢測(cè)(苯胺藍(lán)和色霉素A3染色)的具體實(shí)驗(yàn)操作及討論。手冊(cè)重寫(xiě)了計(jì)算機(jī)輔助精子分析(CASA)部分,強(qiáng)調(diào)了CASA對(duì)于檢測(cè)精子濃度的局限性與質(zhì)控要求,增加了CASA檢測(cè)精子超活化運(yùn)動(dòng)的內(nèi)容。對(duì)精子跨膜離子流和轉(zhuǎn)運(yùn)的功能分析,可更好地了解男性不育因素和男性生殖***疾病。為此,手冊(cè)新增了檢測(cè)精子跨膜離子流和轉(zhuǎn)運(yùn)的內(nèi)容。選擇合適的CASA檢測(cè)原理和設(shè)備,確保幀率要求,避免因設(shè)備問(wèn)題影響檢測(cè)結(jié)果?。上海狗精子分析DSL
全自動(dòng)精子分析儀極大提高臨床檢驗(yàn)水平,廣泛應(yīng)用于泌尿科,男性科以及計(jì)劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。上海水生動(dòng)物精子分析頻閃光源
CASA系統(tǒng)進(jìn)行**分析應(yīng)注意以下幾點(diǎn):3.2**分析儀閾值的確定(1)精子灰度、對(duì)比度閾值:由于分析儀是根據(jù)灰度的高低來(lái)判斷精子的真?zhèn)?,?duì)亮度和對(duì)比度要求特別高,檢測(cè)時(shí)應(yīng)多次試用,尋找能準(zhǔn)確識(shí)別精子的比較好灰度閾值[8]。(2)碎片:測(cè)定精子濃度準(zhǔn)確性受**中細(xì)胞成份和非精子的顆粒物質(zhì)的干擾,測(cè)定活動(dòng)精子的百分率也受精子中非精子物質(zhì)的影響[9],這些也是需要注意的。對(duì)于系統(tǒng)誤認(rèn)為精子的非精子成分,如精原細(xì)胞、白細(xì)胞和非白細(xì)胞顆粒等,可人為準(zhǔn)確記數(shù)后在可刪除雜質(zhì)一欄將其舍去。3.3出現(xiàn)1次異常結(jié)果應(yīng)間隔復(fù)查反復(fù)檢查2?3次方能得出比較正確的結(jié)果。3.4對(duì)于無(wú)精子的患者應(yīng)仔細(xì)進(jìn)行視野檢查注意不要將雜質(zhì)誤認(rèn)為精子計(jì)數(shù)在內(nèi),應(yīng)將**3000ɡ離心15分鐘后,再涂片檢查,確認(rèn)無(wú)精后再出報(bào)告。上海水生動(dòng)物精子分析頻閃光源